2) Май-Грюнвальду
3) Цилю — Нильсену (+)
4) Граму
Окраска по Цилю—Нильсену применяется для выявления кислотоустойчивых микобактерий в мазках мокроты, прежде всего Mycobacterium tuberculosis. Кислотоустойчивость обусловлена высоким содержанием миколовых кислот и других липидов в клеточной стенке микобактерий, благодаря чему они после окрашивания карболовым фуксином сохраняют красный цвет при обработке кислотно-спиртовым раствором. На контрастном фоне микобактерии выявляются как тонкие красные палочки.
Обнаружение кислотоустойчивых микобактерий в мокроте методом микроскопии расценивается как лабораторное подтверждение бактериовыделения и имеет важное эпидемиологическое значение: пациент потенциально способен выделять возбудителя во внешнюю среду. Интенсивность бактериовыделения оценивают по количеству обнаруженных микобактерий в мазке или по градации результата. При этом микроскопия не позволяет достоверно определить вид микобактерии и лекарственную чувствительность, поэтому положительный результат уточняют молекулярно-генетическими методами и культуральным исследованием.
| Метод или признак | Принцип | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Окраска по Цилю—Нильсену | Карболовый фуксин, обесцвечивание кислотно-спиртовым раствором, докраска контрастным красителем | Выявление кислотоустойчивых микобактерий в мазке мокроты; подтверждает наличие бактериовыделения |
| Флуорохромная окраска | Использование аурамин-родамина и выявление светящихся микобактерий в люминесцентном микроскопе | Более высокая чувствительность при скрининге, особенно при малом количестве возбудителя; требует специального оборудования |
| Окраска по Граму | Обычная дифференциация бактерий по строению клеточной стенки | Не является стандартным методом обнаружения микобактерий из-за слабого и непостоянного окрашивания |
| Положительный мазок | В поле зрения выявляются красные кислотоустойчивые палочки на синем фоне | Свидетельствует о высокой вероятности микобактериальной инфекции и повышенной заразности пациента |
| Отрицательный мазок | Кислотоустойчивые микобактерии не обнаружены в исследованном материале | Не исключает туберкулёз при низкой концентрации возбудителя, неправильном сборе мокроты или недостаточном объёме материала |
| Молекулярно-генетическое исследование | Определение ДНК микобактерий и, в отдельных тестах, мутаций лекарственной устойчивости | Быстро подтверждает туберкулёзную инфекцию и может выявлять устойчивость к рифампицину |
| Культуральное исследование | Выращивание микобактерий на питательных средах или в жидких системах | Наиболее подтверждающий метод с возможностью видовой идентификации и определения лекарственной чувствительности, но результат получают дольше |
Для повышения вероятности обнаружения возбудителя исследуют правильно собранную утреннюю мокроту, обычно полученную при повторных обследованиях. Результат микроскопии оценивают вместе с клиническими, рентгенологическими и молекулярно-генетическими данными. Кислотоустойчивость характерна не только для M. tuberculosis, поэтому окончательная верификация возбудителя требует дополнительных методов. Окраски Папаниколау и Май—Грюнвальда предназначены преимущественно для цитологической или гематологической оценки и не используются как основной способ диагностики бактериовыделения при туберкулёзе.