2) ЖСА
3) Клиглера (+)
4) КУА
Среда Клиглера (Kligler iron agar, KIA) является дифференциально-диагностической средой для первичной биохимической идентификации представителей порядка Enterobacterales. Она содержит глюкозу, лактозу, индикатор кислотности и соединения железа; в ряде вариантов также присутствует тиосульфат натрия. Одновременно оценивают ферментацию углеводов, образование газа и продукцию сероводорода.
Среда имеет скошенную поверхность и столбик, что позволяет создать зоны с различным доступом кислорода. При ферментации глюкозы образуется кислота, и среда желтеет; если микроорганизм ферментирует только глюкозу, на аэробном скосе возможно последующее ощелачивание с покраснением, тогда как столбик остается желтым. Ферментация лактозы поддерживает кислую реакцию во всей пробирке. Потемнение среды в столбике указывает на образование сероводорода, а трещины или разрыв агара — на продукцию газа.
Такой набор признаков позволяет предварительно разделять лактозоположительные и лактозоотрицательные энтеробактерии и отличать их от микроорганизмов с иными метаболическими свойствами. ЖСА преимущественно применяют для выделения и дифференциации стафилококков по солеустойчивости и активности в отношении компонентов желтка, поэтому она не предназначена для комплексной оценки сахаролитических свойств энтеробактерий. Среда Клиглера дает именно комбинацию ключевых реакций, необходимую на этапе первичной идентификации.
| Исследуемый признак | Проявление на среде Клиглера | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Ферментация глюкозы | Желтая окраска столбика; реакция может быть выражена также на скосе | Подтверждает сахаролитическую активность; оценивается совместно с результатом по лактозе |
| Ферментация лактозы | Сохранение кислой реакции и желтой окраски на скосе и в столбике | Характерно для лактозоположительных представителей, например Escherichia coli и многих Klebsiella |
| Профиль A/A | Кислая реакция на скосе и в столбике | Обычно свидетельствует о ферментации глюкозы и лактозы; возможна продукция газа |
| Профиль K/A | Красный скос и желтый столбик | Указывает на ферментацию только глюкозы при отсутствии ферментации лактозы, что характерно для многих сальмонелл и шигелл |
| Образование сероводорода | Черное окрашивание, преимущественно в столбике | Позволяет выявлять сероводородпродуцирующие штаммы, включая часть Salmonella и Proteus |
| Газообразование | Пузырьки, трещины, поднятие или разрыв агара | Дополнительный дифференциальный признак ферментации углеводов |
| Ограничения метода | Результат оценивают по совокупности реакций через установленное время инкубации | Среда обеспечивает предварительную, а не окончательную видовую идентификацию; необходимы дополнительные тесты |
Посев выполняют уколом в столбик с последующим штрихом по скосу, чтобы оценить реакции в анаэробной и аэробной зонах. Интерпретация профиля Клиглера дополняется тестами на оксидазу, уреазу, индол, цитрат, подвижность и другими методами. Для окончательной идентификации могут использоваться автоматизированные биохимические системы, MALDI-TOF-масс-спектрометрия или молекулярно-генетические методы.