2) глюкозы 10%
3) формалина
4) этилового спирта 70%
Физиологический раствор является правильной транспортной средой, поскольку исследование подвижности ресничек выполняют на живых клетках мерцательного эпителия. Изотоническая концентрация натрия хлорида поддерживает осмотическое равновесие, сохраняет целостность клеточных мембран и препятствует набуханию или обезвоживанию клеток. Благодаря этому сохраняется АТФ-зависимая работа аксонемальных динеиновых комплексов, обеспечивающих ритмичные движения ресничек.
Функциональную активность ресничек оценивают преимущественно методом высокоскоростной видеомикроскопии, определяя частоту и характер их биения. Материал необходимо доставлять и исследовать как можно быстрее, поскольку охлаждение, перегрев, изменение pH и осмолярности способны вызвать вторичную дискинезию и привести к ложноположительному заключению о нарушении мукоцилиарного клиренса. В специализированных лабораториях вместо физиологического раствора могут применяться фосфатно-солевой буфер или питательные среды, однако среди предложенных вариантов только изотонический раствор пригоден для сохранения жизнеспособности реснитчатых клеток.
Формалин и 70%-ный этиловый спирт являются фиксирующими агентами: они необратимо повреждают или денатурируют клеточные белки, прекращая движение ресничек. Раствор глюкозы 10% обладает выраженной гиперосмолярностью, вызывает выход воды из клеток и изменяет реологические свойства поверхностной жидкости эпителия, поэтому наблюдаемое снижение частоты биения не будет отражать исходное функциональное состояние.
| Среда или раствор | Воздействие на эпителий | Пригодность для исследования подвижности |
|---|---|---|
| Физиологический раствор натрия хлорида | Поддерживает близкую к плазме осмолярность и сохраняет жизнеспособность клеток при быстрой доставке | Пригоден; правильный вариант среди предложенных |
| Фосфатно-солевой буфер или культуральная среда | Стабилизирует осмолярность и pH; специализированные среды дополнительно поддерживают клеточный метаболизм | Может применяться по утвержденному лабораторному протоколу |
| Раствор глюкозы 10% | Создает гиперосмолярную среду, вызывает дегидратацию клеток и функциональное угнетение ресничек | Непригоден из-за риска артефактной дискинезии |
| Формалин | Фиксирует ткани путем образования поперечных связей между белками и прекращает клеточный метаболизм | Непригоден для функциональной оценки; используется для морфологических исследований |
| Этиловый спирт 70% | Денатурирует белки, обезвоживает и разрушает клеточные мембраны | Непригоден, поскольку движение ресничек необратимо прекращается |
| Несвоевременная доставка | Сопровождается снижением жизнеспособности эпителия и изменением частоты и паттерна биения | Повышает риск недостоверного или неинтерпретируемого результата |
Нарушение движения ресничек приводит к снижению мукоцилиарного клиренса и может наблюдаться при первичной цилиарной дискинезии, а также вторично — при инфекции, воспалении или неправильном обращении с образцом. Поэтому патологический результат видеомикроскопии оценивают совместно с клиническими данными, уровнем назального оксида азота, электронной микроскопией и молекулярно-генетическими исследованиями. Забор материала желательно проводить вне периода острой респираторной инфекции, чтобы минимизировать приобретенные изменения ресничек. Соблюдение условий транспортировки является обязательным элементом преаналитического контроля качества.