2) настаивание с этанолом
3) кислотный гидролиз
4) щелочной гидролиз (+)
В моче каннабиноиды выводятся преимущественно не в свободном виде, а после биотрансформации и конъюгации с глюкуроновой кислотой. Наиболее значимым маркером употребления тетрагидроканнабинола является 11-нор-9-карбокси-Δ9-тетрагидроканнабинол (THC-COOH) и его глюкуронидные производные. Конъюгаты обладают повышенной полярностью, поэтому плохо переходят в хлороформную фазу, что ограничивает эффективность прямой жидкость–жидкость экстракции.
Щелочной гидролиз разрушает лабильные связи конъюгатов и высвобождает свободный метаболит, увеличивая его суммарное количество, доступное для последующей экстракции и инструментального определения. После гидролиза обычно проводят подкисление: в кислой среде карбоксильная группа THC-COOH переходит преимущественно в недиссоциированную форму, что облегчает распределение соединения в органическом растворителе. Кислотный гидролиз менее предпочтителен из-за риска декарбоксилирования и деградации каннабиноидных метаболитов, а обработка этанолом не расщепляет глюкуронидные конъюгаты и не решает проблему их низкой экстрагируемости.
| Объект или метод | Химическая характеристика | Влияние на результат |
|---|---|---|
| Свободный THC-COOH | Относительно липофильная недиссоциированная форма | Может переходить в органическую фазу при корректном подкислении |
| Глюкуронидные конъюгаты | Полярные, хорошо растворимые в водной фазе | Плохо извлекаются хлороформом без предварительного гидролиза |
| Щелочной гидролиз | Расщепляет конъюгированные формы и высвобождает метаболит | Повышает степень извлечения и аналитическую чувствительность |
| Кислотный гидролиз | Может сопровождаться декарбоксилированием и химической деградацией | Способен снижать выход целевого метаболита и изменять профиль аналитов |
| Прямая экстракция хлороформом | Извлекает главным образом свободную липофильную фракцию | Дает неполное извлечение при преобладании конъюгатов |
| Настаивание с этанолом | Растворяет часть органических соединений, но не обеспечивает гидролиз | Не является оптимальной подготовкой мочи; возможно соэкстрагирование примесей |
| Подтверждающий анализ | LC-MS/MS или GC-MS после валидированной пробоподготовки | Обеспечивает идентификацию THC-COOH по специфичным ионам или переходам |
Выбор щелочного гидролиза основан на необходимости определять суммарную концентрацию свободного и конъюгированного метаболита. Эффективность процедуры зависит от концентрации щёлочи, температуры, времени контакта и последующего подкисления, поэтому эти параметры должны быть валидированы для конкретной методики. Обнаружение THC-COOH в моче подтверждает факт предшествующего поступления каннабиноидов, но само по себе не свидетельствует о текущем состоянии опьянения и не позволяет точно установить время употребления.