2) экскрецией
3) концентрацией (+)
4) фильтрацией
Калибровочная кривая в спектроскопии устанавливает количественную связь между величиной экстинкции (абсорбции, оптической плотности) и содержанием определяемого вещества в пробе. Экстинкция рассчитывается как A = lg(I0/I), где I0 — интенсивность падающего излучения, а I — интенсивность прошедшего света. Поэтому увеличение концентрации поглощающего соединения обычно приводит к возрастанию экстинкции.
Теоретической основой служит закон Бугера—Ламберта—Бера: A = ε·l·c, где ε — молярный коэффициент поглощения, l — длина оптического пути, c — концентрация вещества. При постоянных длине кюветы и длине волны зависимость в пределах рабочего диапазона является линейной. Калибровку выполняют по сериям стандартных растворов с известной концентрацией, после чего концентрацию аналита в неизвестной пробе определяют по соответствующей экстинкции.
Секреция, экскреция и фильтрация характеризуют физиологические процессы образования, выделения или прохождения веществ через биологические барьеры и не являются параметрами калибровочной зависимости. В лабораторной практике оценивают также линейность графика, величину холостого сигнала, матричный эффект и воспроизводимость измерений. При отклонении от линейности пробу разбавляют либо используют иной способ калибровки, например метод стандартных добавок.
| Элемент калибровки | Содержание и аналитическое значение |
|---|---|
| Стандартные растворы | Содержат известные концентрации аналита и формируют экспериментальные точки зависимости экстинкция — концентрация . |
| Холостой раствор | Не содержит аналита; его сигнал учитывают для коррекции фонового поглощения растворителя, реагентов и кюветы. |
| Наклон прямой | Характеризует чувствительность метода: чем больше изменение экстинкции при увеличении концентрации, тем выше аналитическая чувствительность. |
| Линейный диапазон | Интервал концентраций, в котором экспериментальные данные соответствуют закону Бугера—Ламберта—Бера и результаты количественного анализа наиболее достоверны. |
| Точка пересечения с осью ординат | Отражает систематический фон или остаточный сигнал; значимое ненулевое значение требует проверки холостой пробы и условий измерения. |
| Метод внешней калибровки | Концентрацию неизвестной пробы находят по графику стандартов; метод применим при сопоставимой матрице стандартов и исследуемых образцов. |
| Метод стандартных добавок | Известные количества аналита добавляют непосредственно в исследуемую пробу, что позволяет частично компенсировать влияние сложной матрицы. |
Калибровочная кривая позволяет преобразовать инструментальный сигнал в количественный результат. Для расчёта используют только участок, в котором сохраняется линейность и подтверждена приемлемая точность измерений. При высокой концентрации, рассеянии света, химическом взаимодействии компонентов или насыщении детектора экстинкция может перестать быть пропорциональной концентрации. В таких случаях необходимы разведение образца, расширенная калибровка или применение валидированной нелинейной модели.