2) диско-диффузионным
3) методом Кротова
4) методом Дригальского (+)
Метод Дригальского основан на механическом разобщении микробных клеток при их последовательном распределении по поверхности плотной питательной среды. Исследуемый материал наносят на агар и стерильным шпателем последовательно растирают по участкам чашки, каждый раз перенося всё меньшее количество клеток. В результате плотность посева постепенно снижается, а отдельные клетки или небольшие клеточные группы оказываются пространственно разделёнными.
После инкубации на месте разделённых клеток формируются изолированные колонии. Колония, происходящая от одной клетки или генетически близкой клеточной группы, служит исходным материалом для получения чистой культуры. При выборе колонии учитывают её морфологию, отсутствие смешанного роста, а чистоту культуры подтверждают микроскопией, пересевом и оценкой однородности культуральных и биохимических признаков.
Именно поэтому правильным является метод Дригальского: его диагностическая и методическая основа — физическое разобщение микроорганизмов без использования избирательного действия антибиотиков или других селективных факторов. Другие перечисленные подходы имеют иное назначение: посев уколом обеспечивает внесение материала в толщу среды, диско-диффузионный метод оценивает чувствительность к антимикробным препаратам, а метод Кротова применяется преимущественно для количественного исследования микробной обсеменённости воздуха.
| Метод или подход | Основной принцип | Практическое назначение | Основной результат |
|---|---|---|---|
| Метод Дригальского | Последовательное механическое распределение посевного материала по поверхности агара шпателем | Выделение изолированных колоний и получение чистой культуры | Разобщённые колонии с возможностью дальнейшего пересева |
| Штриховой посев | Механическое истощение инокулюма при нанесении последовательных штрихов петлёй | Рутинное выделение чистых культур | Изолированные колонии в последних зонах посева |
| Посев уколом | Введение петли с материалом в глубину плотной или полужидкой среды | Изучение подвижности, отношения к кислороду, роста в толще среды | Рост по линии укола или в определённой зоне среды; эффективного поверхностного разобщения не обеспечивает |
| Диско-диффузионный метод | Диффузия антибиотика из диска в агар с подавлением роста чувствительных микроорганизмов | Определение чувствительности к антимикробным препаратам | Диаметр зоны задержки роста, интерпретируемый по нормативным критериям |
| Метод Кротова | Аспирационное прокачивание воздуха через прибор с осаждением микроорганизмов на питательную среду | Количественная оценка микробной обсеменённости воздуха | Число выросших колоний с расчётом содержания микроорганизмов в объёме воздуха |
| Метод серийных разведений с высевом | Снижение концентрации клеток последовательным разведением исследуемого материала | Количественный учёт жизнеспособных микроорганизмов и получение отдельных колоний | Количество колониеобразующих единиц в единице объёма или массы материала |
| Посев на селективную среду | Подавление сопутствующей микрофлоры и преимущественный рост целевой группы микроорганизмов | Первичное выделение предполагаемого возбудителя из смешанной микробиоты | Рост характерных колоний целевой группы, требующий последующей идентификации |
Эффективность метода Дригальского зависит от правильной стерилизации шпателя, равномерности распределения материала и соблюдения режима инкубации. Для выделения чистой культуры выбирают изолированные колонии, не соприкасающиеся с соседними и имеющие однородные морфологические признаки. При обильном или смешанном росте материал пересевают повторно, иногда предварительно выполняя разведение. Окончательное заключение о чистоте культуры основывают не только на внешнем виде колоний, но и на результатах микроскопического, культурального и биохимического контроля.