2) использование цитоцентрифуги или аппарата Сайка (+)
3) обогащение осадка отстаиванием пробы в течение 2-3 часов
4) центрифугирование ликвора на скорости выше 3500 об/мин
Цитоцентрифуга и аппарат Сайка обеспечивают направленное осаждение клеток ликвора непосредственно на ограниченный участок предметного стекла. При этом используется контролируемая центробежная сила, а жидкая фаза удаляется через фильтрующий материал, поэтому даже при низкой клеточности образца удаётся получить концентрированный монослой с минимальной утратой форменных элементов.
Ликвор содержит мало клеток, которые быстро подвергаются дегенеративным изменениям и цитолизу после взятия материала. Обычное центрифугирование сопровождается потерей клеток при удалении надосадочной жидкости и переносе осадка, а чрезмерная скорость может вызывать механическое повреждение клеточных мембран и искажение морфологии. Длительное отстаивание также неприемлемо, поскольку способствует разрушению лейкоцитов и снижает достоверность цитологического исследования.
Получение равномерного клеточного препарата особенно важно для подсчёта и дифференцировки нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов, опухолевых и атипичных клеток. Сохранность цитоморфологических признаков повышает диагностическую ценность исследования при менингитах, субарахноидальном кровоизлиянии, нейроонкологических и лимфопролиферативных заболеваниях.
| Метод подготовки | Принцип | Потеря клеток | Сохранность морфологии | Диагностическая оценка |
|---|---|---|---|---|
| Цитоцентрифуга | Направленное осаждение клеток на малую площадь стекла | Минимальная | Высокая при правильно выбранном режиме | Предпочтительна при низкой цитозе ликвора |
| Аппарат Сайка | Концентрация клеток с одновременным удалением жидкой фазы | Минимальная | Хорошая | Позволяет получить равномерный окрашенный препарат |
| Низкоскоростное обычное центрифугирование | Осаждение клеток на дно пробирки | Умеренная или высокая | Относительно сохранена | Возможна утрата клеток при сливании надосадочной жидкости |
| Высокоскоростное центрифугирование | Быстрое осаждение под действием большой центробежной силы | Непредсказуемая | Снижена из-за деформации и цитолиза | Может затруднять идентификацию клеток |
| Отстаивание пробы | Самопроизвольное оседание клеток | Высокая | Низкая вследствие дегенеративных изменений | Не подходит для срочной и точной цитодиагностики |
| Мазок из перенесённого осадка | Ручное нанесение концентрата на стекло | Зависит от техники | Возможны механические артефакты | Менее воспроизводим по сравнению с цитоспином |
Исследование клеточного состава ликвора следует выполнять как можно быстрее после люмбальной пункции, поскольку выраженный цитолиз может начаться уже в первые часы хранения. Режим цитоконтрификации подбирают так, чтобы обеспечить достаточную концентрацию клеток без их деформации. Качественный препарат должен содержать равномерно распределённый монослой, пригодный для оценки ядра, цитоплазмы и характера клеточной популяции. Такой подход снижает вероятность ложноотрицательного результата при поиске редких патологических клеток.