2) Грама
3) Циля — Нильсена
4) Папаниколау
Метод Романовского—Гимзы применяется для окраски мазка периферической крови при подсчёте лейкоцитарной формулы, поскольку обеспечивает дифференцированное выявление клеток по их морфологическим и тинкториальным свойствам. В состав красителя входят эозин и основные анилиновые красители — производные метиленового синего и азура. Кислые клеточные структуры окрашиваются преимущественно в розово-красные оттенки, а базофильные компоненты, прежде всего ядра и рибосомальные структуры, — в сине-фиолетовые.
После фиксации мазка метанолом и окрашивания становятся различимыми форма и структура ядра, степень конденсации хроматина, соотношение ядра и цитоплазмы, наличие гранул и особенности их окраски. Это позволяет распознавать нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, лимфоциты и моноциты, а также выявлять патологические формы клеток, бластные элементы, токсическую зернистость нейтрофилов и атипичные лимфоциты. На основании подсчёта определённого числа лейкоцитов рассчитывают относительное содержание клеточных популяций; при необходимости его дополняют оценкой абсолютного числа клеток.
Другие перечисленные методы предназначены для иных диагностических задач. Окраска по Граму используется главным образом для дифференциации бактерий по строению клеточной стенки, окраска по Цилю—Нильсену — для выявления кислотоустойчивых микроорганизмов, а метод Папаниколау — преимущественно для цитологического исследования эпителиальных клеток. Поэтому именно окраска Романовского—Гимзы является стандартным морфологическим подходом к исследованию лейкоцитарной формулы.
| Метод окраски | Основной объект исследования | Принцип окрашивания | Диагностическая задача |
|---|---|---|---|
| Романовского—Гимзы | Клетки периферической крови и костного мозга | Дифференциальное связывание кислых и основных красителей с клеточными структурами | Подсчёт лейкоцитарной формулы и оценка морфологии форменных элементов |
| Грам | Бактерии в клиническом материале | Удерживание кристаллического фиолетового пептидогликановым слоем клеточной стенки | Разделение бактерий на грамположительные и грамотрицательные |
| Циля—Нильсена | Микобактерии и другие кислотоустойчивые микроорганизмы | Устойчивость миколовых кислот к обесцвечиванию кислотно-спиртовой смесью | Выявление кислотоустойчивых бактерий, прежде всего микобактерий |
| Папаниколау | Клетки эпителия, преимущественно в цитологических мазках | Комбинация ядерного и цитоплазматического окрашивания с оценкой степени дифференцировки | Цитологический скрининг и диагностика дисплазий и опухолевых изменений |
| Романовского—Гимзы | Лейкоциты различных морфологических классов | Различия в окраске ядерного хроматина, цитоплазмы и специфической зернистости | Распознавание нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, лимфоцитов и моноцитов |
Качество лейкоцитарной формулы зависит не только от красителя, но и от правильности приготовления тонкого равномерного мазка, его фиксации и соблюдения времени окрашивания. Подсчёт проводят в зоне оптимального распределения клеток, где эритроциты лежат раздельно и лейкоциты сохраняют характерную морфологию. Результат оценивают совместно с общим числом лейкоцитов и клиническими данными. При выраженных отклонениях автоматического анализа необходима микроскопическая верификация мазка.