2) многократного перетирания между двумя предметными стеклами и растягивания между ними
3) растягивания шпателем на всю площадь предметного стекла
4) высушивания под покровным стеклом при комнатной температуре
Для окраски по Цилю—Нильсену используют наиболее информативные фрагменты мокроты: плотные гнойные участки, желтоватые крупинки и тяжи. В этих элементах могут концентрироваться казеозно-некротические массы и кислотоустойчивые микобактерии, тогда как в жидкой слизистой части их содержание обычно ниже. Поэтому отбор плотных включений повышает вероятность обнаружения возбудителя при микроскопии.
Материал растирают шпателем круговыми движениями, формируя на предметном стекле тонкий овальный мазок размером около 2,5×2,0 см. Такое растирание одновременно механически гомогенизирует гнойный фрагмент и распределяет его равномерным слоем, что обеспечивает доступ красителя ко всем участкам препарата и облегчает просмотр поля зрения. После высушивания мазок фиксируют, а затем окрашивают карболовым фуксином с последующим обесцвечиванием кислотным раствором и докрашиванием метиленовым синим.
Кислотоустойчивые микобактерии сохраняют красный цвет карболового фуксина благодаря высокому содержанию липидов, прежде всего миколовых кислот, в клеточной стенке. Обычная бактериальная флора и клеточные элементы мокроты обесцвечиваются и приобретают синий цвет, что создает контраст для выявления красных извитых или слегка изогнутых палочек. Растягивание материала на всю поверхность стекла или перетирание между двумя стеклами не обеспечивает оптимальной толщины и может привести к неравномерному распределению возбудителя.
| Элемент методики | Правильный подход | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Выбор материала | Плотные гнойные участки, желтоватые крупинки, тяжи | Повышает вероятность попадания участков с высокой концентрацией микобактерий |
| Подготовка мазка | Растирание шпателем круговыми движениями | Гомогенизирует материал и обеспечивает равномерное распределение частиц |
| Размер и форма | Тонкий овальный мазок примерно 2,5×2,0 см | Создает оптимальную толщину препарата для окраски и микроскопии |
| Состояние мазка перед окраской | Высушивание на воздухе с последующей фиксацией | Закрепляет материал на стекле и предотвращает его смывание при окрашивании |
| Основной краситель | Карболовый фуксин с прогреванием | Проникает в богатую липидами клеточную стенку микобактерий |
| Обесцвечивание | Обработка кислотным обесцвечивающим раствором | Удаляет краситель из большинства клеток, но не из кислотоустойчивых микобактерий |
| Микроскопический признак | Красные палочки на синем фоне | Соответствует выявлению кислотоустойчивых бактерий; результат оценивают с учетом клинических и лабораторных данных |
Мазок должен быть достаточно тонким, но содержать репрезентативное количество отобранного материала. Высушивание под покровным стеклом недопустимо, поскольку препятствует полноценной фиксации и может нарушить равномерность окраски. Обнаружение кислотоустойчивых бактерий является важным признаком туберкулезной инфекции, однако не позволяет самостоятельно отличить комплекс Mycobacterium tuberculosis от нетуберкулезных микобактерий. Для видовой идентификации и определения лекарственной устойчивости применяют молекулярно-генетические и культуральные методы.