2) 30 дней
3) 12 часов
4) 24 часов (+)
Пробу цельной крови для ПЦР-исследования на ДНК или РНК инфекционных агентов следует хранить при 2–8 °C не более 24 часов. Такой режим ограничивает активность нуклеаз, замедляет разрушение клеток крови и поддерживает стабильность генетического материала возбудителя до этапа выделения нуклеиновых кислот. Особенно быстро деградирует РНК, поэтому для РНК-содержащих вирусов соблюдение временных ограничений имеет критическое значение.
При более длительном хранении происходят гемолиз и лизис лейкоцитов, высвобождаются гемоглобин, клеточные нуклеазы и другие ингибирующие компоненты. Это может снижать эффективность экстракции и амплификации, увеличивать значение порогового цикла (Ct/Cq) или приводить к ложноотрицательному результату. Указанный срок является преаналитическим ограничением для цельной крови; конкретные требования могут уточняться инструкцией к набору реагентов и валидированной методикой лаборатории.
| Условие или фактор | Влияние на результат ПЦР | Практическое значение |
|---|---|---|
| Цельная кровь, 2–8 °C, до 24 часов | Сохраняется приемлемая стабильность целевого материала и клеточных компонентов | Оптимальный стандартный режим до выделения ДНК/РНК |
| Цельная кровь при 2–8 °C более 24 часов | Нарастают клеточный лизис, деградация нуклеиновых кислот и влияние ингибиторов | Повышается риск снижения аналитической чувствительности и ложноотрицательного результата |
| Хранение при комнатной температуре | Ускоряются метаболические процессы, разрушение РНК и изменение клеточного состава | Не применяется, если иное не предусмотрено валидированной методикой |
| Замораживание цельной крови | Образуются кристаллы льда, разрушающие клетки и изменяющие состав матрицы | Допустимо только при наличии соответствующей валидации; повторные циклы замораживания и оттаивания нежелательны |
| ЭДТА-кровь | Обычно обеспечивает приемлемое сохранение клеточных и молекулярных компонентов | Предпочтительный антикоагулянт, если он указан в инструкции к тест-системе |
| Кровь с гемолизом или сгустками | Гемоглобин и клеточный детрит могут ингибировать ПЦР и ухудшать экстракцию | Образец оценивают по критериям приемлемости и при необходимости бракуют или запрашивают повторный забор |
| Образцы для выявления РНК | РНК менее стабильна, чем ДНК, и особенно чувствительна к РНКазам | Требуются максимально быстрая доставка, охлаждение и строгое соблюдение преаналитического протокола |
После поступления в лабораторию кровь необходимо как можно быстрее подготовить к экстракции, соблюдая требования к типу пробирки и антикоагулянту. Гепарин может ингибировать некоторые этапы амплификации, поэтому его применение допустимо только при подтвержденной совместимости с тест-системой. Интерпретация Ct/Cq должна учитывать качество образца и наличие внутреннего контроля амплификации. Отрицательный результат при нарушении сроков или условий хранения требует осторожной оценки и, при наличии клинических показаний, повторного исследования.