2) цитопатическому действию в зараженной культуре (+)
3) степени инактивирования гомологичных антител
4) интенсивности роста возбудителя на питательных средах
Индикация вируса в культуре клеток основана на выявлении признаков его репродукции. При размножении вирус повреждает инфицированные клетки, что проявляется цитопатическим действием: округлением и сморщиванием клеток, нарушением монослоя, появлением внутриклеточных включений, образованием синцитиев или лизисом клеточной культуры. Такие изменения регистрируют при микроскопическом наблюдении заражённой культуры в сравнении с контрольной незаражённой культурой.
Цитопатический эффект является прямым фенотипическим признаком присутствия и репликации вируса, поэтому его используют для первичной индикации вирусов. При этом он не всегда специфичен для конкретного возбудителя: окончательную идентификацию проводят с помощью реакции иммунофлуоресценции, иммуноферментного анализа, ПЦР, реакции нейтрализации или секвенирования. Отсутствие цитопатического эффекта также не исключает вирусную инфекцию, поскольку некоторые вирусы размножаются без выраженного повреждения клеток.
Нарастание титра антител в парных сыворотках отражает иммунный ответ и подтверждает инфекцию ретроспективно, но не служит непосредственным признаком наличия вируса в культуре. Вирусы не выращиваются на стандартных питательных средах, предназначенных для бактерий и грибов, а оценка инактивации антител относится к серологическим методам. Следовательно, правильным является признак цитопатического действия в заражённой культуре.
| Метод или признак | Что выявляет | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Цитопатическое действие | Морфологические изменения и разрушение клеток при репликации вируса | Первичная индикация вируса в культуре; требует контроля и последующей идентификации |
| Гемадсорбция или гемагглютинация | Способность некоторых вирусов связывать эритроциты | Дополнительный метод обнаружения отдельных вирусов, особенно орто- и парамиксовирусов |
| Иммунофлуоресценция | Вирусные антигены с помощью специфических меченых антител | Подтверждает наличие и помогает идентифицировать вирус в клетках |
| ПЦР или ОТ-ПЦР | ДНК или РНК вируса | Высокочувствительное обнаружение генома; не всегда доказывает наличие жизнеспособного вируса |
| Четырёхкратное и более нарастание титра антител | Динамику специфического иммунного ответа | Серологическое подтверждение недавней инфекции, обычно по парным сывороткам |
| Рост на обычных питательных средах | Размножение бактерий или грибов | Для вирусов нехарактерен; вирусы требуют живых клеток, эмбрионов или лабораторных животных |
Выраженность цитопатического эффекта зависит от вида вируса, типа клеточной культуры, инфекционной дозы и продолжительности инкубации. Оценку проводят только при наличии адекватных положительных и отрицательных контролей. Если морфологические изменения отсутствуют, применяют методы обнаружения вирусных антигенов или нуклеиновых кислот. Таким образом, цитопатический эффект является ключевым признаком индикации, а специфическая идентификация требует дополнительных лабораторных тестов.