2) реакцию иммуноблоттинга
3) реакцию бластной трансформации лимфоцитов
4) реакцию иммунного лейколиза
К экспресс-методам диагностики холеры относят реакцию иммунофлюоресценции и реакцию иммобилизации вибрионов. При прямой иммунофлюоресценции антитела, меченные флуорохромом, связываются с антигенами Vibrio cholerae в мазке из испражнений или ректального материала; специфические светящиеся объекты выявляют при люминесцентной микроскопии. Метод позволяет получить ориентировочный результат в течение нескольких часов.
Реакция иммобилизации основана на утрате подвижности холерных вибрионов при взаимодействии с типоспецифической антисывороткой. В норме вибрионы активно движутся благодаря жгутикам, а после связывания антител с поверхностными антигенами их движение резко ослабевает или прекращается. Совокупность морфологии, характерной подвижности и специфической иммобилизации позволяет заподозрить наличие возбудителя холеры, прежде всего серогрупп O1 или O139.
Экспресс-реакции имеют ориентировочное значение и не заменяют выделение культуры возбудителя с последующей идентификацией и определением серогруппы. Иммуноблоттинг, реакция бластной трансформации лимфоцитов и реакция иммунного лейколиза преимущественно характеризуют иммунный ответ или используются в специальных лабораторных исследованиях; они не являются стандартными методами быстрого обнаружения холерного вибриона в испражнениях.
| Метод | Материал и принцип | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Прямая иммунофлюоресценция | Мазок из испражнений или ректального материала; выявление антигенов вибриона флуоресцирующими антителами | Быстрое предварительное обнаружение V. cholerae непосредственно в клиническом материале |
| Реакция иммобилизации вибрионов | Смешивание исследуемого материала со специфической антисывороткой; прекращение или резкое уменьшение подвижности вибрионов | Экспресс-подтверждение специфической принадлежности подозрительных вибрионов |
| Бактериологический метод | Посев испражнений или ректального мазка на селективные среды с последующей идентификацией культуры | Основной подтверждающий метод; позволяет определить вид и серогруппу возбудителя |
| ПЦР | Амплификация специфических участков ДНК V. cholerae и генов токсигенности | Высокоспецифичное быстрое выявление возбудителя или генетических маркеров токсигенности |
| Иммуноблоттинг | Определение антител или отдельных антигенов после разделения белков электрофорезом | Специальный подтверждающий или исследовательский метод, не относящийся к стандартной экспресс-диагностике холеры |
| Реакция бластной трансформации лимфоцитов | Оценка пролиферативного ответа лимфоцитов на антигенную стимуляцию | Характеризует клеточный иммунный ответ, а не непосредственно наличие вибрионов в кишечнике |
| Реакция иммунного лейколиза | Оценка повреждения лейкоцитов под действием антител и комплемента | Не используется как рутинный экспресс-тест для выявления холеры |
При подозрении на холеру исследуют испражнения, рвотные массы или ректальный мазок, соблюдая правила биологической безопасности. Быстрое выявление вибриона важно для немедленного начала регидратации и проведения противоэпидемических мероприятий. Окончательная верификация диагноза основывается на результатах культурального исследования, а при наличии возможностей дополняется молекулярными методами. Отрицательный результат экспресс-реакции не исключает холеру при типичной клинической картине и требует повторного или культурального исследования.