2) серологический
3) иммунологический
4) биологический
Основным методом лабораторной диагностики холеры является бактериологическое исследование, поскольку оно позволяет непосредственно выделить и идентифицировать возбудителя — Vibrio cholerae. Материалом служат испражнения, рвотные массы или ректальный мазок, которые желательно брать до начала антибактериальной терапии и быстро доставлять в лабораторию. Для повышения чувствительности применяют обогащение в щелочной пептонной воде с последующим посевом на селективные среды, например тиосульфат-цитрат-желчно-сахарозный агар.
Идентификация выделенной культуры включает оценку морфологических и биохимических свойств: вибрионы представляют собой грамотрицательные изогнутые подвижные бактерии, обычно оксидазоположительные и хорошо растущие в щелочной среде. Видовую принадлежность подтверждают реакциями агглютинации с диагностическими сыворотками к серогруппам O1 или O139; при необходимости определяют наличие генов токсигенности, прежде всего ctxA. Именно обнаружение токсигенного холерного вибриона имеет решающее значение для подтверждения диагноза.
Серологические методы имеют вспомогательное значение и чаще применяются для ретроспективной диагностики или эпидемиологических исследований, поскольку специфические антитела формируются не сразу. Иммунологические экспресс-тесты и молекулярные методы могут ускорить предварительное выявление возбудителя, однако в классической лабораторной диагностике и при подтверждении случая ведущим остается выделение культуры.
| Этап или метод | Основной диагностический признак | Практическое значение |
|---|---|---|
| Забор материала | Испражнения, рвотные массы, ректальный мазок | Материал берут до антибиотикотерапии; соблюдают меры биологической безопасности |
| Первичное обогащение | Рост в щелочной пептонной воде | Щелочная среда способствует накоплению холерных вибрионов и подавляет часть сопутствующей флоры |
| Посев на селективную среду | Рост характерных колоний на TCBS-агаре | Позволяет выделить подозрительные колонии из клинического материала |
| Микроскопия и биохимия | Грамотрицательные изогнутые подвижные палочки, оксидазоположительность | Формирует предварительное заключение о принадлежности к роду Vibrio |
| Серогруппирование | Агглютинация с сыворотками O1 или O139 | Определяет эпидемиологически значимые серогруппы холерного вибриона |
| Оценка токсигенности | Выявление холерного энтеротоксина или генов его синтеза | Помогает отличить токсигенный штамм от нетоксигенных вибрионов |
| Серологическая диагностика | Нарастание титра специфических антител в парных сыворотках | Имеет преимущественно ретроспективное и эпидемиологическое значение |
Бактериологическое подтверждение особенно важно при вспышках острой водянистой диареи, поскольку позволяет одновременно установить возбудителя и провести его эпидемиологическое типирование. Отрицательный результат посева не исключает холеру при позднем взятии материала или предварительном приеме антибиотиков. В таких ситуациях применяют молекулярные тесты или экспресс-методы как дополнительные исследования. Выделение культуры также необходимо для определения чувствительности к антибактериальным препаратам при тяжелом течении и осложненной эпидемиологической ситуации.