2) теста кожного окна
3) НСТ-теста (+)
4) иммуноблоттинга
Бактерицидность фагоцитов в значительной степени определяется эффективностью кислородзависимого механизма уничтожения микроорганизмов — респираторного взрыва . При его активации нейтрофилы образуют активные формы кислорода, включая супероксид-анион, перекись водорода и гипохлорит. НСТ-тест с нитросиним тетразолием выявляет способность фагоцитов восстанавливать этот субстрат до нерастворимого синего формазана; по доле окрашенных клеток судят о выраженности окислительного метаболического ответа.
Положительный НСТ-тест свидетельствует о сохранности кислородзависимой бактерицидной системы нейтрофилов, а резко сниженное или отсутствующее восстановление НСТ характерно для дефектов NADPH-оксидазного комплекса, прежде всего при хронической гранулематозной болезни. Исследование может проводиться в спонтанном и стимулированном вариантах, что позволяет оценить исходную активность и функциональный резерв фагоцитов. Иммуноферментный анализ и иммуноблоттинг предназначены главным образом для выявления антигенов, антител или отдельных белков, тогда как тест кожного окна оценивает преимущественно миграцию и клеточный состав воспалительного экссудата, а не бактерицидный потенциал.
| Метод | Основной объект оценки | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| НСТ-тест | Кислородзависимый метаболизм нейтрофилов и образование активных форм кислорода | Оценка функциональной бактерицидности фагоцитов; снижение характерно для дефекта респираторного взрыва |
| Тест с индуцированным НСТ | Резерв окислительного ответа после стимуляции фагоцитов | Позволяет выявить неполноценность активации даже при относительно сохранной спонтанной активности |
| Тест кожного окна | Миграция лейкоцитов в зону стерильного воспаления и клеточный состав экссудата | Характеризует хемотаксис и воспалительную реакцию, но не непосредственно бактерицидность |
| Иммуноферментный анализ | Специфические антигены, антитела, цитокины и другие растворимые молекулы | Применяется для серологической и иммунологической диагностики, не оценивает окислительный взрыв нейтрофилов |
| Иммуноблоттинг | Антитела к индивидуальным белковым антигенам после их разделения электрофорезом | Используется для подтверждения специфической иммунологической реакции или идентификации белка |
| Тест восстановления НСТ у здоровых фагоцитов | Появление внутриклеточных гранул формазана | Указывает на активацию NADPH-оксидазы и наличие кислородзависимого механизма уничтожения микробов |
НСТ-тест отражает не все механизмы фагоцитоза, а прежде всего способность клеток генерировать активные формы кислорода. Для подтверждения хронической гранулематозной болезни в современной практике часто используют проточную цитометрию с дигидрородамином 123, которая точнее характеризует респираторный взрыв и позволяет анализировать распределение дефектных клеток. Тем не менее в рамках представленной классификации именно НСТ-тест является функциональным методом оценки бактерицидности фагоцитов. Интерпретацию результата проводят с учетом стимулятора, контрольных значений и клинических проявлений иммунодефицита.