2) гранулоцитов
3) эритроцитов
4) мононуклеаров (+)
Для оценки клеточного звена иммунитета используют мононуклеарную фракцию периферической крови, или PBMC (peripheral blood mononuclear cells). Она включает лимфоциты и моноциты, клетки которых имеют одно несегментированное ядро. Основное значение имеют Т-лимфоциты, обеспечивающие клеточно-опосредованный иммунный ответ, а также NK-клетки и моноциты, участвующие в цитотоксичности, фагоцитозе и регуляции воспаления.
Мононуклеары выделяют из цельной крови центрифугированием в градиенте плотности, чаще с использованием фиколла. Полученная фракция применяется для проточной цитометрии и иммунофенотипирования: определяют маркеры CD3, CD4, CD8, CD16/CD56, CD19, CD14, оценивают соотношение субпопуляций, экспрессию активационных антигенов и жизнеспособность клеток. Из этих же клеток проводят функциональные тесты — оценку пролиферации лимфоцитов, продукции цитокинов, цитотоксической активности и реакции на митогены или специфические антигены.
Гранулоциты отделяются от мононуклеаров благодаря большей плотности и имеют сегментированные ядра, поэтому в стандартную мононуклеарную фракцию не входят. Эритроциты не содержат ядра и не являются иммунокомпетентными клетками, а тромбоциты представляют собой безъядерные фрагменты мегакариоцитов. Таким образом, именно мононуклеарная фракция содержит основной набор клеток, необходимый для комплексного исследования клеточного иммунитета.
| Клеточная популяция | Основные маркеры | Функциональная роль | Возможности лабораторной оценки |
|---|---|---|---|
| Т-лимфоциты | CD3; CD4 или CD8 | Клеточный иммунитет, помощь В-лимфоцитам, цитотоксическое уничтожение клеток | Подсчёт общего числа, субпопуляций CD4+ и CD8+, определение их соотношения |
| В-лимфоциты | CD19, CD20, CD79a | Антителообразование и презентация антигена | Оценка количества В-клеток и нарушений комбинированного иммунного ответа |
| NK-клетки | CD16, CD56; отсутствие CD3 | Естественная цитотоксичность против инфицированных и опухолевых клеток | Определение содержания и функциональной цитотоксической активности |
| Моноциты | CD14, HLA-DR | Фагоцитоз, презентация антигена, продукция цитокинов | Оценка количества, степени активации и экспрессии HLA-DR |
| Гранулоциты | Сегментированное ядро, CD15, CD66b | Фагоцитоз и эффекторные реакции врождённого иммунитета | Исследуются преимущественно в отдельной гранулоцитарной фракции |
| Эритроциты | Безъядерные клетки, гемоглобин | Транспорт кислорода и углекислого газа | Не используются для иммунного фенотипирования |
| Тромбоциты | Безъядерные фрагменты, CD41/CD61 | Гемостаз и участие в воспалительных взаимодействиях | Не являются клеточной фракцией для стандартной оценки иммунитета |
Результаты исследования зависят от качества выделения клеток, времени доставки образца, выбранного антикоагулянта и сохранности жизнеспособности клеток. При интерпретации учитывают абсолютное количество и процентное содержание субпопуляций, а не только относительные показатели. Иммунофенотипирование мононуклеаров особенно важно при подозрении на иммунодефициты, лимфопролиферативные заболевания, аутоиммунные процессы и для мониторинга иммуномодулирующей терапии.