2) подсчет клеток на гематологическом анализаторе
3) реакцию бласттрансформации
4) иммунофенотипирование с антителами против CD19, CD20, CD22, CD79 (+)
Содержание В-лимфоцитов в периферической крови определяют методом иммунофенотипирования, чаще всего с использованием проточной цитометрии. Метод основан на специфическом связывании моноклональных антител с антигенами клеточной поверхности или внутриклеточными белками. Для В-клеточной линии наиболее характерна экспрессия CD19, CD20, CD22 и CD79; по интенсивности и сочетанию этих маркеров можно идентифицировать В-лимфоциты среди других лейкоцитов.
Проточная цитометрия позволяет определить как относительное содержание В-клеток в процентах от лимфоцитов, так и их абсолютное количество с учетом общего числа лейкоцитов. Подсчет на гематологическом анализаторе не устанавливает принадлежность клеток к В-клеточной линии, цитохимическая реакция на миелопероксидазу предназначена преимущественно для выявления клеток миелоидного ряда, а реакция бласттрансформации оценивает функциональный ответ лимфоцитов на стимуляцию и не является методом их прямого количественного определения.
| Клеточная популяция или признак | Типичный иммунофенотип | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Зрелые В-лимфоциты | CD19+, CD20+, CD22+, CD79+ | Подтверждают принадлежность клеток к В-клеточной линии; именно эта популяция обычно оценивается при подсчете В-лимфоцитов крови |
| В-клеточные предшественники | CD19+, CD79a+, часто CD10+; CD20 слабый или отрицательный, поверхностный иммуноглобулин отсутствует | Характерны для ранних стадий дифференцировки и могут выявляться при исследовании костного мозга или В-клеточных неоплазий |
| Плазматические клетки | CD38 яркий, CD138+; CD19 и CD20 часто отсутствуют или экспрессируются слабо | Не всегда учитываются как обычные зрелые В-лимфоциты; их выделяют в отдельную терминально дифференцированную популяцию |
| Т-лимфоциты | CD3+, обычно CD4+ или CD8+ | Отличаются от В-клеток отсутствием характерного В-клеточного профиля и наличием пан-Т-клеточного маркера CD3 |
| NK-клетки | CD3−, CD16+ и/или CD56+ | Позволяют дифференцировать естественные киллеры от В- и Т-лимфоцитов при иммунологическом анализе лимфоцитарной формулы |
| Миелоидные клетки | Миелопероксидаза+, часто CD13+ и CD33+ | Выявляются с помощью миелоидных маркеров и цитохимии; не относятся к В-клеточной популяции |
| Количественная оценка методом проточной цитометрии | Доля CD19+/CD20+/CD22+/CD79+ клеток среди лимфоцитов; абсолютное число рассчитывают по лейкоцитам | Позволяет выявлять В-клеточную лимфопению, лимфоцитоз и патологические клональные популяции |
Выбор панели антител зависит от клинической задачи и предполагаемого уровня дифференцировки клеток. При подозрении на В-клеточную лимфопролиферацию дополнительно оценивают легкие цепи иммуноглобулинов κ и λ, что помогает выявить клональность. Результаты интерпретируют с учетом возраста, абсолютного числа лимфоцитов, иммунного статуса и референсных интервалов лаборатории. Таким образом, сочетанная экспрессия В-клеточных CD-маркеров является основой достоверного определения количества В-лимфоцитов в крови.