2) увеличение количества анализируемых клеток
3) дополнительное цитохимическое или флуоресцентное окрашивание (+)
4) дополнительный подсчет ретикулоцитов
Дополнительное цитохимическое или флуоресцентное окрашивание позволяет повысить информативность автоматического лейкоцитарного дифференцирования. В обычных каналах анализатора клетки классифицируются преимущественно по размеру, электрическому сопротивлению, светорассеянию и внутренней структуре. Бластные, незрелые или атипичные клетки могут иметь параметры, перекрывающиеся с нормальными лимфоцитами и гранулоцитами, поэтому при подозрении на патологическую популяцию анализатор выполняет рефлекторное исследование в дополнительном канале.
При цитохимическом подходе оценивается, например, активность миелопероксидазы и других внутриклеточных компонентов, характерных для клеток миелоидного ряда. Флуоресцентные методы используют красители нуклеиновых кислот и органелл; сочетание интенсивности флуоресценции, светорассеяния и других параметров обеспечивает более точное разделение клеточных популяций и формирование диагностических флагов: бласты , атипичные лимфоциты , незрелые гранулоциты . Такой результат не заменяет микроскопию мазка и проточную цитометрию, но является основанием для углубленного исследования.
| Метод или канал | Оцениваемый принцип | Диагностическая ценность | Основное ограничение |
|---|---|---|---|
| Импедансный подсчет | Изменение электрического сопротивления при прохождении клетки через апертуру | Подсчет клеток и ориентировочная оценка их объема | Ограниченная возможность различать клетки близкого размера и выявлять атипичные формы |
| Оптическое светорассеяние | Оценка размера, внутриклеточной структуры и гранулярности | Разделение основных популяций лейкоцитов в стандартной лейкоцитарной формуле | Перекрытие параметров у бластов, реактивных лимфоцитов и незрелых клеток |
| Цитохимическое окрашивание | Выявление внутриклеточных ферментов, например миелопероксидазы | Дополнительное различение миелоидных и немиелоидных клеточных популяций | Не все патологические клетки имеют специфическую или достаточно выраженную ферментативную активность |
| Флуоресцентное окрашивание | Связывание флуорохромов с нуклеиновыми кислотами и клеточными структурами | Повышение чувствительности к бластам, атипичным лимфоцитам и незрелым гранулоцитам | Формирует подозрение, но не устанавливает окончательный диагноз и клеточную линию во всех случаях |
| Увеличение числа анализируемых клеток | Снижение статистической ошибки при подсчете | Повышение точности количественных показателей при малой концентрации клеток | Не улучшает принципиально морфологическое распознавание патологических клеток |
| Подсчет ретикулоцитов | Определение молодых форм эритроцитов по остаточной РНК | Оценка эритропоэза и регенераторной активности костного мозга | Не предназначен для выявления патологических лейкоцитов |
| Определение осмотической резистентности | Оценка устойчивости клеток к гипотоническому воздействию | Применяется преимущественно для характеристики эритроцитов | Не является штатным методом поиска атипичных клеток белой крови |
Автоматическое выявление патологических лейкоцитов обычно начинается с анализа флагов и аномальных распределений на клеточных диаграммах. При их наличии выполняют повторное исследование, микроскопию мазка периферической крови и, при необходимости, иммунophenотипирование методом проточной цитометрии. Особенно важно учитывать клинические данные и результаты общего анализа крови, поскольку реактивные и неопластические изменения могут частично имитировать друг друга. Поэтому дополнительное окрашивание служит эффективным инструментом скрининга, а окончательная верификация требует комплексной оценки.
Учебный курс: тесты с ответами по КЛД.