2) 1 и 2
3) 3 и 4-1,4-2
4) 1 и 3
Правильный ответ — совмещение рабочих зон 2 и 3. Зона 2 предназначена для выделения ДНК или РНК из клинического материала, а зона 3 — для подготовки реакционных смесей до этапа амплификации. Обе операции относятся к допамплификационному этапу, поэтому их допускается размещать в одном помещении при обязательном выполнении работ в отдельных боксах биологической безопасности.
Раздельные боксы предотвращают перекрёстное загрязнение: в одном выполняют операции с потенциально инфицированным материалом, в другом — манипуляции с реагентами и выделенными нуклеиновыми кислотами. Необходимы также отдельные наборы оборудования и расходных материалов, маркировка, регулярная дезинфекция и однонаправленное движение материала от более загрязнённой зоны к более чистой. Такое разделение особенно важно при ПЦР, поскольку даже следовые количества ампликона способны вызвать ложноположительный результат вследствие экспоненциального накопления продукта реакции.
Зоны 4-1 и 4-2 связаны с амплификацией и детекцией продуктов амплификации и должны быть изолированы от допамплификационных помещений. Открытие пробирок после амплификации, электрофоретическое разделение или иная детекция создают высокий риск аэрозольного распространения ампликонов. Поэтому объединение зон 2 или 3 с зонами 4-1, 4-2, а также с зоной первичной обработки материала нарушает принцип зонирования и повышает вероятность контаминации.
| Зона | Основной этап | Ключевой риск | Организационное требование |
|---|---|---|---|
| 1 | Приём, регистрация, первичная обработка и хранение клинического материала | Поступление биологически опасного материала и образование аэрозолей | Изоляция от помещений с чистыми реагентами и продуктами ПЦР |
| 2 | Выделение ДНК/РНК из исследуемого материала | Контакт с потенциально инфицированными образцами, риск биологического загрязнения | Работа в боксе биологической безопасности с выделенным оборудованием |
| 3 | Приготовление реакционных смесей и внесение выделенных нуклеиновых кислот | Контаминация реагентов и проб чужеродной ДНК/РНК | Отдельный бокс, чистые расходные материалы и инструменты |
| 4-1 | Проведение амплификации | Накопление большого количества ампликонов даже при закрытых пробирках | Изолированное помещение или участок, исключающий возврат материала |
| 4-2 | Детекция и учёт продуктов амплификации | Наиболее высокий риск распространения ампликонов при открытии пробирок | Строгое отделение от всех допамплификационных зон |
| 2 + 3 | Совместное размещение выделения нуклеиновых кислот и подготовки реакций | Перекрёстная контаминация при смешении потоков | Допускается только при наличии отдельных боксов, оборудования и соблюдении однонаправленного потока |
Ключевой принцип организации ПЦР-лаборатории — физическое разделение допамплификационных и постамплификационных процессов. Совмещение зон 2 и 3 возможно, поскольку ампликоны на этих этапах ещё не образуются. После начала амплификации любые обратные перемещения материалов, персонала и оборудования в чистые зоны должны быть исключены. Соблюдение этого принципа обеспечивает достоверность результатов и снижает риск ложноположительных реакций.