2) электрофореза с сульфатом аммония
3) реакции на берлинскую лазурь (+)
4) бензидиновой реакции Адлера
Гемосидерин в моче выявляют реакцией на берлинскую лазурь, или реакцией Перлса. Метод основан на обнаружении трехвалентного железа (Fe3+), входящего в состав гемосидерина: в кислой среде оно взаимодействует с ферроцианидом калия с образованием нерастворимого пигмента интенсивно синего цвета. В осадке мочи окрашиваются гранулы гемосидерина, обычно расположенные внутри эпителиальных клеток проксимальных канальцев или в виде свободных включений.
Гемосидеринурия является признаком преимущественно внутрисосудистого гемолиза. Освободившийся гемоглобин фильтруется в клубочках, реабсорбируется клетками канальцев и после внутриклеточного распада гема накапливается в виде гемосидерина; избыток пигмента выделяется с мочой. Такое исследование имеет диагностическое значение при пароксизмальной ночной гемоглобинурии, механическом гемолизе, реакциях на переливание крови и других состояниях, сопровождающихся хроническим внутрисосудистым разрушением эритроцитов.
Бензидиновая и ортотолуидиновая реакции основаны на псевдопероксидазной активности гемсодержащих соединений и выявляют прежде всего гемоглобин, поэтому могут давать положительный результат при гемоглобинурии, гематурии и миоглобинурии. Электрофорез с сульфатом аммония не является стандартным специфическим методом определения гемосидерина в мочевом осадке. Таким образом, именно реакция на берлинскую лазурь позволяет подтвердить наличие железосодержащего пигмента и отличить гемосидеринурию от изолированного присутствия растворенного гемоглобина.
| Исследуемый признак | Гемосидеринурия | Гемоглобинурия | Гематурия | Миоглобинурия |
|---|---|---|---|---|
| Источник пигмента | Гемосидерин, образующийся при распаде гемоглобина в клетках канальцев | Свободный гемоглобин при внутрисосудистом гемолизе | Интактные эритроциты из мочевых путей или почечной ткани | Миоглобин при повреждении скелетных мышц |
| Вид осадка | Зернистые сине-голубые включения после реакции Перлса | Обычно без специфически окрашенных гранул гемосидерина | Эритроциты при микроскопии осадка | Эритроциты отсутствуют либо их количество не объясняет окраску |
| Реакция на кровь тест-полоской | Может быть положительной при сопутствующем выделении гемоглобина | Положительная | Положительная | Положительная |
| Реакция на берлинскую лазурь | Положительная; выявляет Fe3+ гемосидерина | Обычно отрицательная как реакция на депонированное железо | Отрицательная | Отрицательная |
| Микроскопическая характеристика | Сидерофаги и гранулы пигмента в клетках канальцев | Эритроциты отсутствуют или представлены в небольшом количестве | Количество эритроцитов соответствует степени положительной реакции | Эритроциты отсутствуют, осадок может быть маловыраженным |
| Типичные клинические ситуации | Пароксизмальная ночная гемоглобинурия, хронический внутрисосудистый гемолиз, механическая травма эритроцитов | Острый внутрисосудистый гемолиз, несовместимое переливание крови | Гломерулонефрит, мочекаменная болезнь, опухоли мочевых путей | Рабдомиолиз, массивная физическая нагрузка, синдром длительного сдавления |
Положительная реакция Перлса подтверждает наличие железа в форме гемосидерина, но должна интерпретироваться вместе с общим анализом мочи, микроскопией осадка и показателями гемолиза. Для оценки причины внутрисосудистого гемолиза дополнительно определяют лактатдегидрогеназу, непрямой билирубин, гаптоглобин и ретикулоциты. При подозрении на пароксизмальную ночную гемоглобинурию ключевым подтверждающим исследованием является проточная цитометрия с выявлением дефицита GPI-связанных белков CD55 и CD59.