2) фосфорилирования
3) гидролиза
4) взаимодействия антигена с антителом (+)
Иммунологические методы основаны на специфическом взаимодействии антигена с антителом. Антиген содержит эпитопы — участки, распознаваемые паратопами антител; их связывание обусловлено нековалентными силами и зависит от комплементарности, аффинности и авидности. Образование иммунного комплекса позволяет обнаруживать либо антиген, либо антитела в исследуемом материале.
Для регистрации реакции используют различные метки и физико-химические эффекты: ферментативную, флуоресцентную или хемилюминесцентную метку, преципитацию, агглютинацию, изменение светорассеяния. Поэтому иммуноферментный анализ, иммунофлуоресценция, иммуноблоттинг, нефелометрия и проточная цитометрия относятся к иммунологическим методам, хотя отличаются способом визуализации результата.
Комплемент может участвовать в отдельных вариантах иммунологических реакций, например в реакции связывания комплемента, однако он выполняет роль эффектора или индикаторной системы, а не является универсальной основой метода. Фосфорилирование и гидролиз представляют собой биохимические процессы, которые могут использоваться для формирования измеряемого сигнала, но сами по себе не обеспечивают специфического распознавания мишени.
| Метод | Основной объект определения | Принцип регистрации | Типичный диагностический пример |
|---|---|---|---|
| Иммуноферментный анализ | Антиген или специфические антитела | Ферментная метка превращает субстрат в окрашенный продукт; интенсивность сигнала связана с концентрацией аналита | Определение антител к вирусам, гормонов, аутоантител |
| Иммунофлуоресцентный метод | Антиген в клетках или тканях | Флуоресцентно меченое антитело визуализируется в люминесцентном микроскопе | Выявление аутоантител при системных заболеваниях соединительной ткани |
| Иммуноблоттинг | Антитела к отдельным белковым антигенам | После разделения белков электрофорезом специфическое связывание выявляют меченым конъюгатом | Подтверждение антительного ответа к определённым антигенам микроорганизма |
| Реакция агглютинации | Антиген на поверхности клеток или частиц | Перекрёстное связывание антителами приводит к образованию видимых агрегатов | Серологическая идентификация бактерий, определение групп крови |
| Нефелометрия и турбидиметрия | Растворимые антигены или антитела | Иммунные комплексы изменяют интенсивность рассеяния или прохождения света | Количественное определение иммуноглобулинов и компонентов комплемента |
| Проточная цитометрия | Антигены клеточной поверхности или внутриклеточные маркеры | Меченые антитела регистрируются по флуоресценции отдельных клеток в потоке | Иммунофенотипирование клеток крови и диагностика лейкозов |
Специфичность иммунологических исследований определяется соответствием антитела антигену, а аналитическая чувствительность — возможностью обнаруживать низкие концентрации иммунного комплекса. На результат могут влиять перекрёстные реакции, неспецифическое связывание, матричные эффекты и наличие антител раннего или позднего класса. Интерпретация должна учитывать клинические данные, диагностическую чувствительность и специфичность тест-системы.