2) инактивирует сериновые протеазы
3) ингибирует образование фибрина
4) необратимо связывает Са (+)
ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) непригоден для исследования плазменного гемостаза, поскольку образует прочные хелатные комплексы с ионами кальция Ca2+. Кальций является обязательным кофактором нескольких этапов плазменного каскада свертывания: участвует в сборке фермент-субстратных комплексов на фосфолипидной поверхности и необходим для генерации тромбина и последующего образования фибрина. Поэтому правильным является вариант 4 — связывание ионов кальция; в практической лабораторной терминологии это взаимодействие рассматривают как практически необратимое для условий стандартного тестирования.
В отличие от цитрата натрия, связывание кальция ЭДТА нельзя надежно устранить простой рекальцификацией образца. При добавлении кальция в пробу, содержащую ЭДТА, значительная часть ионов остается связанной хелатором, а исходная концентрация свободного кальция и условия реакции не восстанавливаются. Это приводит к выраженному подавлению свертывания и делает результаты протромбинового времени, активированного частичного тромбопластинового времени и других коагулологических тестов аналитически недостоверными.
ЭДТА широко применяется в гематологии, например для получения цельной крови при подсчете клеток, поскольку эффективно предотвращает свертывание и сохраняет клеточные элементы. Однако для исследования плазменного гемостаза используют преимущественно цитратную плазму: цитрат связывает кальций обратимо, а при постановке реакции заданное количество кальция можно добавить вновь и стандартизировать условия измерения.
| Антикоагулянт | Основной механизм | Обратимость связывания кальция | Типичный материал или применение | Пригодность для коагулологических тестов |
|---|---|---|---|---|
| ЭДТА | Сильное хелатирование Ca2+ | Практически необратимое в условиях анализа | Цельная кровь для общего анализа крови | Не пригоден |
| Цитрат натрия | Обратимое связывание Ca2+ | Восстанавливается добавлением кальция | Цитратная плазма для коагулограммы | Стандартный антикоагулянт |
| Гепарин | Усиление действия антитромбина, преимущественно против тромбина и фактора Xa | Не является хелатором кальция | Биохимические и газовые исследования крови | Обычно не используется для рутинных тестов свертывания |
| Оксалат | Осаждение кальция в виде нерастворимых солей | Восстановление ограничено | Некоторые специальные виды проб | Ограниченно применим, может влиять на результаты |
| Фторид натрия | Ингибирование гликолиза, а не основное воздействие на каскад свертывания | Не является оптимальным средством связывания кальция | Исследование глюкозы в отдельных вариантах проб | Не используется как основной антикоагулянт для коагулологии |
| Рекальцификация образца | Добавление стандартизованного Ca2+ для запуска свертывания | Эффективна при обратимом связывании цитратом | Постановка коагуляционных тестов | Невозможна с надежным восстановлением системы при наличии ЭДТА |
Ключевой принцип преаналитики в коагулологии заключается в сохранении возможности управляемо восстановить свертывание после взятия крови. Для цитратной плазмы важны правильное соотношение крови и антикоагулянта, а также достаточное заполнение пробирки. Использование ЭДТА приводит не просто к задержке образования фибрина, а к нарушению кальцийзависимых реакций всего каскада. Поэтому результаты, полученные из ЭДТА-плазмы, нельзя интерпретировать как достоверную оценку плазменного гемостаза.