2) рабочих зон 3 А и 3 Б
3) рабочей зоны 2
4) рабочей зоны 1
Наиболее загрязнённой продуктами амплификации считается защитная одежда, используемая в рабочих зонах 4 1 и 4 2 . Эти зоны предназначены для проведения амплификации и последующей детекции ампликонов — многократно скопированных фрагментов нуклеиновых кислот. При открывании пробирок, переносе реакционных смесей, электрофоретическом разделении или ином анализе продуктов возможно образование аэрозоля и микрокапель, содержащих ампликоны.
Ампликоны присутствуют в очень высокой концентрации и легко переносятся на перчатках, халате, обуви и рабочие поверхности. Даже небольшое количество такого материала, попавшее в доамплификационные зоны, может стать матрицей для последующей реакции и привести к контаминации лаборатории и ложноположительным результатам ПЦР. Поэтому защитная одежда из зон 4 1 и 4 2 не должна использоваться в более чистых зонах; для неё предусматриваются раздельное хранение, регулярная смена и соблюдение однонаправленного движения персонала и материалов.
| Рабочая зона | Основные операции | Основной источник загрязнения | Относительный риск контаминации ампликонами | Принцип обращения с защитной одеждой |
|---|---|---|---|---|
| 1 | Подготовка реагентов и реакционных смесей | Минимальный риск заноса нуклеиновых кислот извне | Низкий | Используется только в чистой зоне |
| 2 | Подготовка и первичная обработка исследуемого материала | Клинический материал и исходные нуклеиновые кислоты | Низкий или умеренный; ампликонов ещё нет | Не переносится в постамплификационные помещения |
| 3 А | Выделение или подготовка нуклеиновых кислот к постановке реакции | Исходный материал, реагенты и возможный перенос образцов | Умеренный, преимущественно доамплификационный риск | Одежда не должна контактировать с зоной детекции |
| 3 Б | Внесение подготовленных образцов в реакционные смеси | Исследуемые образцы и аэрозоли при дозировании | Умеренный; продукты амплификации не являются рабочим материалом | Соблюдаются отдельные потоки персонала и материалов |
| 4 1 | Амплификация нуклеиновых кислот | Реакционные пробирки с большим количеством ампликонов, аэрозоли при их открывании | Высокий | Защитная одежда закрепляется за данной зоной |
| 4 2 | Детекция и анализ продуктов амплификации | Ампликоны, открытые пробирки, продукты электрофореза и загрязнённые поверхности | Максимальный | Вынос одежды и материалов в чистые зоны не допускается |
Такое зонирование основано на разделении доамплификационных и постамплификационных процессов. Главный критерий отнесения защитной одежды к наиболее загрязнённой — непосредственный контакт с ампликонами или вероятность образования ампликонсодержащего аэрозоля. Профилактика ложноположительных результатов включает раздельное оборудование, смену перчаток, дезактивацию поверхностей и движение от более чистых зон к более загрязнённым.