2) 3,0-5,2
3) 6,8-7,2 (+)
4) 5,5-6,0
Для окраски мазков крови по Романовскому—Гимзе используют фосфатный буфер слабокислой или близкой к нейтральной реакции — обычно pH 6,8–7,2. В этом диапазоне сохраняется оптимальная ионизация компонентов красителя: основных производных метиленового синего и кислого эозина. Благодаря этому ядра и хроматин плазмодиев приобретают фиолетово-красный оттенок, цитоплазма паразита окрашивается в голубой цвет, а эритроциты получают хорошо различимую розовую окраску.
Стабильность pH имеет принципиальное диагностическое значение, поскольку окраска должна одновременно выявлять внутритроцитарные формы Plasmodium, особенности их хроматина, цитоплазмы и пигмента. При чрезмерно щелочной реакции мазок может становиться избыточно синим, ухудшается контраст между паразитом и эритроцитами; при кислой реакции преобладает действие эозина, появляются красноватые оттенки и теряются тонкие морфологические детали. Такие артефакты способны затруднить обнаружение малярийных плазмодиев и их видовую идентификацию.
Фосфатный буфер также обеспечивает воспроизводимость окраски в толстой и тонкой капле крови. Толстая капля применяется преимущественно для повышения чувствительности при малой паразитемии, а тонкий мазок — для оценки морфологии и определения вида возбудителя. Поэтому диапазон pH 6,8–7,2 является не формальным параметром, а необходимым условием качественной микроскопической диагностики малярии.
| Условие или объект | Особенности окраски и диагностическое значение |
|---|---|
| Фосфатный буфер pH 6,8–7,2 | Обеспечивает оптимальное соотношение основных и кислых компонентов красителя и четкую визуализацию паразита. |
| Кислая реакция среды | Усиливает эозинофильную, красноватую окраску; детали хроматина и цитоплазмы плазмодия могут становиться менее различимыми. |
| Щелочная реакция среды | Усиливает базофильную, синеватую окраску; возрастает риск забитого фона и снижения контраста между эритроцитами и паразитами. |
| Тонкий мазок крови | Сохраняет морфологию эритроцитов и плазмодиев; используется для видовой идентификации и оценки стадии развития. |
| Толстая капля | После гемолиза эритроцитов концентрирует паразитов, повышая чувствительность исследования при низкой паразитемии. |
| Хроматин плазмодия | Окрашивается в красно-фиолетовый цвет; его форма и расположение помогают отличать кольцевидные и зрелые внутритроцитарные формы. |
| Пигмент малярийного плазмодия | Представлен зернами гемозои коричневато-черного цвета; выявляется преимущественно в зрелых трофозоитах и шизонтах. |
Таким образом, правильным является диапазон pH 6,8–7,2, наиболее близкий к физиологически нейтральной реакции и обеспечивающий дифференциальное действие красителя. Корректный pH особенно важен при малой паразитемии и при необходимости различать виды малярийных плазмодиев. Оценку результата проводят с учетом качества мазка, времени окрашивания и выраженности морфологических признаков.