2) методом нейтрализации антител
3) методом солевой агглютинации
4) непрямым антиглобулиновым тестом (+)
Скрининг антиэритроцитарных антител выполняют непрямым антиглобулиновым тестом (непрямой пробой Кумбса). Исследуемую сыворотку или плазму пациента инкубируют со стандартными эритроцитами-скрининг-клетками, несущими основные клинически значимые антигены систем ABO, Rh, Kell, Kidd, Duffy и MNS. После инкубации эритроциты отмывают от несвязавшихся иммуноглобулинов и добавляют антиглобулиновый реагент, содержащий антитела к IgG человека и, в зависимости от состава, к компонентам комплемента.
Многие иммунные антиэритроцитарные антитела относятся к неполным IgG: они фиксируются на мембране эритроцитов, но не вызывают видимой агглютинации в физиологическом солевом растворе. Антиглобулиновый реагент связывает молекулы IgG на соседних эритроцитах и формирует видимую агглютинацию; ее наличие расценивают как положительный результат скрининга. Метод позволяет выявлять аллоантитела, возникающие после гемотрансфузий или беременности, а также некоторые аутоантитела и тем самым предупреждать гемолитические трансфузионные реакции и гемолитическую болезнь плода и новорожденного.
| Метод или этап | Исследуемый материал и принцип | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Непрямой антиглобулиновый тест | Сыворотка пациента инкубируется со стандартными эритроцитами, затем после отмывания добавляется антиглобулиновый реагент | Основной метод скрининга антител в сыворотке, особенно клинически значимых IgG |
| Прямая антиглобулиновая проба | Исследуются эритроциты пациента, уже покрытые in vivo IgG и/или компонентами комплемента | Выявляет иммунное покрытие собственных эритроцитов; применяется при подозрении на аутоиммунный гемолиз и гемолитическую болезнь новорожденного, но не для стандартного скрининга сывороточных антител |
| Солевая агглютинация | Реакция антител с эритроцитами непосредственно в физиологическом растворе | Лучше выявляет крупные IgM-антитела; недостаточно чувствительна для большинства неполных IgG-алоантител |
| Панель идентификации антител | Положительная сыворотка исследуется с расширенной панелью эритроцитов известного антигенного состава | Устанавливает специфичность антитела и помогает выбрать совместимые эритроциты |
| Проба на совместимость | Сыворотку реципиента проверяют с эритроцитами конкретного донора | Оценивает индивидуальную совместимость перед переливанием и не заменяет предварительный скрининг |
| Ферментные методы | Обработка эритроцитов ферментами усиливает или изменяет экспрессию отдельных антигенов | Может использоваться как дополнительный прием при идентификации, но не является самостоятельной заменой антиглобулинового скрининга |
| Преципитация и нейтрализация | Основаны на образовании осадка или блокировании антител растворимым антигеном | Не являются стандартными методами рутинного выявления антиэритроцитарных антител |
При положительном скрининге проводят идентификацию антител по расширенной панели и определяют антигенный профиль пациента, а при необходимости — фенотип или генотип эритроцитарных антигенов. Для трансфузии подбирают эритроцитсодержащие компоненты, отрицательные по соответствующему антигену, с последующей индивидуальной проверкой совместимости. Отрицательный результат не исключает антител с очень низким титром или ранее выявлявшихся антител, поэтому учитывают трансфузионный и акушерский анамнез. Наиболее значимыми с клинической точки зрения являются антитела систем Rh и Kell, а также Kidd и Duffy.