2) антитела с антигеном (+)
3) фермента и субстрата
4) комплемента с носителем
Иммунологические методы основаны на специфическом связывании антитела с соответствующим антигеном. Антитело распознаёт определённый эпитоп — участок антигенной молекулы — посредством антигенсвязывающего центра, образуя иммунный комплекс. Высокая специфичность этой реакции позволяет выявлять в биологическом материале как антигены микроорганизмов, гормоны и опухолевые маркеры, так и антитела, сформировавшиеся в ответ на инфекционный или аутоиммунный процесс.
Само образование комплекса антиген–антитело часто не сопровождается сигналом, доступным непосредственному измерению, поэтому в лабораторных тестах применяют метки и индикаторные системы. Ими могут быть ферменты, флуорохромы, хемилюминесцентные соединения, радиоизотопы или окрашенные частицы. Взаимодействие фермента с субстратом при иммуноферментном анализе является лишь способом визуализации или количественной регистрации первичной иммунологической реакции, а не её основой.
| Метод | Принцип регистрации | Типичный диагностический объект |
|---|---|---|
| Иммуноферментный анализ | Ферментная метка превращает субстрат с образованием окрашенного продукта | Антитела, антигены, гормоны, цитокины |
| Иммунохемилюминесцентный анализ | Интенсивность свечения пропорциональна количеству иммунных комплексов | Гормоны, онкомаркеры, кардиомаркеры |
| Иммунофлуоресценция | Флуоресцентная метка выявляет локализацию связанного антитела | Аутоантитела, антигены микроорганизмов |
| Иммунохроматография | Меченые комплексы перемещаются по мембране и формируют видимую тестовую линию | Экспресс-диагностика инфекций, определение ХГЧ |
| Агглютинация | Антитела вызывают видимое склеивание корпускулярных антигенов или частиц-носителей | Антигены эритроцитов, антитела к возбудителям |
| Преципитация | Растворимые антиген и антитело образуют нерастворимый иммунный комплекс | Белковые антигены и специфические антитела |
Диагностическая точность иммунологических исследований зависит от аффинности и специфичности используемых антител, концентрации аналита и соблюдения условий реакции. Возможны перекрёстные реакции, эффект крюка при крайне высокой концентрации антигена и интерференция гетерофильных антител. Поэтому результаты оценивают с учётом клинических данных, референсных интервалов и характеристик конкретной тест-системы. При сомнительном или пограничном результате может потребоваться повторное исследование либо подтверждение методом с иным аналитическим принципом.