2) нейтрофилы
3) лимфоциты (+)
4) моноциты
Фитогемагглютинин (ФГА) — лектин растительного происхождения, используемый как митоген для стимуляции преимущественно Т-лимфоцитов периферической крови. В норме зрелые лимфоциты находятся в состоянии покоя G0, однако после воздействия ФГА происходит их активация, бласттрансформация, синтез интерлейкина-2 и переход в клеточный цикл с последующими митозами.
Именно поэтому ФГА применяют при краткосрочном культивировании лимфоцитов для получения большого числа метафаз при цитогенетическом исследовании. Это позволяет анализировать кариотип, выявлять численные и структурные хромосомные аномалии, в том числе при подозрении на хромосомные синдромы. Наиболее выраженный пролиферативный ответ дают Т-клетки; В-лимфоциты требуют иных стимуляторов и в стандартной культуре с ФГА делятся значительно слабее.
Эритроциты не имеют ядра и не способны к делению. Нейтрофилы являются терминально дифференцированными клетками с короткой продолжительностью жизни, а моноциты в обычной культуре с ФГА не образуют значимой митотически активной популяции. Следовательно, диагностически значимое увеличение числа делящихся клеток при добавлении ФГА связано главным образом с лимфоцитами.
| Клеточная популяция | Ядро | Ответ на ФГА | Основание для оценки |
|---|---|---|---|
| Т-лимфоциты | Сохраняется | Выраженная бласттрансформация и пролиферация | Основная мишень ФГА; используются для получения метафаз в цитогенетике |
| В-лимфоциты | Сохраняется | Слабый или отсутствующий ответ в стандартной культуре | Для стимуляции обычно применяют PWM, анти-CD40/интерлейкин-4 или CpG-олигонуклеотиды |
| NK-клетки | Сохраняется | Активация возможна, но выраженная пролиферация не является типичным эффектом | Не относятся к основной митотической популяции в культуре с ФГА |
| Моноциты | Сохраняется | Значимого деления обычно не наблюдается | В культуре преимущественно выживают и дифференцируются, а не проходят митотический цикл |
| Нейтрофилы | Сохраняется | Не пролиферируют | Терминальная дифференцировка и ограниченная продолжительность жизни препятствуют делению |
| Эритроциты | Отсутствует у зрелых клеток | Не пролиферируют | Отсутствие ядра и органелл исключает репликацию ДНК и митоз |
В цитогенетической лаборатории качество культуры оценивают по числу анализируемых метафаз и величине митотического индекса. Недостаточная стимуляция ФГА может привести к дефициту метафаз и невозможности надежно оценить кариотип. При интерпретации результата важно учитывать, что исследуемая пролиферирующая фракция представлена преимущественно Т-лимфоцитами, а не всеми лейкоцитами крови. Поэтому ответ лимфоциты основан на принципе специфической митогенной стимуляции клеток адаптивного иммунитета.