2) анеуплоидий половых хромосом в интерфазных ядрах
3) анеуплоидий по аутосомам в интерфазных ядрах
4) перицентрических инверсий
Многоцветная FISH (mFISH, spectral karyotyping) основана на одновременной гибридизации набора ДНК-зондов, меченных различными флуорофорами. За счёт комбинации сигналов каждой хромосоме присваивается индивидуальный цвет, что позволяет визуально распознавать её участки в метафазной пластинке. При транслокации производная хромосома содержит фрагменты с разной цветовой меткой, поэтому становятся видимыми как реципрокные, так и сложные многокомпонентные перестройки.
Наиболее значима mFISH при анализе опухолевых кариотипов и сложных хромосомных перестроек, когда обычная дифференциальная окраска не позволяет установить происхождение материала маркерной или производной хромосомы. Метод выявляет хромосомного партнёра транслокации, в том числе при наличии нескольких последовательных обменов. Таким образом, ключевым условием является исследование метафазных хромосом, сохраняющих компактную морфологию и позволяющих сопоставить цветовые профили отдельных хромосом.
Определение анеуплоидий в интерфазных ядрах обычно выполняют с помощью центромерных или локус-специфичных FISH-зондов, подсчитывая число сигналов для конкретных хромосом. Перицентрическая инверсия также, как правило, не определяется стандартной mFISH: после переворота участка вся хромосома сохраняет одну и ту же цветовую метку, поэтому для подтверждения необходимы таргетные зонды, анализ метафазного кариотипа или молекулярное исследование точек разрыва.
| Метод или объект исследования | Основной диагностический результат | Принципиальный признак |
|---|---|---|
| mFISH в метафазе | Выявление транслокаций и сложных перестроек | Разные хромосомы имеют уникальные комбинации флуоресцентных цветов |
| Реципрокная транслокация | Идентификация хромосомных партнёров обмена | Производные хромосомы содержат участки двух различных цветовых профилей |
| Сложный кариотип | Установление происхождения маркерных хромосом и множественных перестроек | Многоцветная маркировка повышает информативность по сравнению с обычной окраской |
| Интерфазная FISH с центромерными зондами | Анеуплоидии аутосом и половых хромосом | Диагноз основан на подсчёте числа специфических сигналов в ядре |
| Перицентрическая инверсия | Перестройка участка одной хромосомы с включением центромеры | При стандартной mFISH хромосома сохраняет единый цвет; необходимы таргетные методы |
| Локус-специфичная FISH | Подтверждение известной транслокации, делеции или инверсии | Зонды направлены на конкретные локусы или предполагаемые точки разрыва |
| Молекулярное исследование точек разрыва | Точное определение генов и нуклеотидных границ перестройки | Применяется, когда цитогенетического разрешения недостаточно |
Результат mFISH следует интерпретировать совместно с данными стандартного кариотипирования и клинической информацией. Метод особенно полезен при подозрении на криптические или сложные транслокации, включая перестройки в опухолевых клетках. Для количественной оценки хромосомного набора в интерфазе предпочтительны специализированные FISH-панели. При необходимости установления точных генов в точках разрыва используют ПЦР, секвенирование или другие методы молекулярной цитогенетики.