2) пятнах высушенной крови и/или в цельной крови с ЭДТА
3) пятнах высушенной крови и/или в цельной крови с гепарином (+)
4) цельной крови с ЭДТА и/или в цельной крови с цитратом
Галактозо-1-фосфат-уридилтрансфераза (GALT) — фермент пути Лелуара, катализирующий превращение галактозо-1-фосфата и УДФ-глюкозы в УДФ-галактозу и глюкозо-1-фосфат. Активность GALT определяют преимущественно в эритроцитах, поэтому пригодными материалами являются пятна высушенной крови и цельная венозная кровь, стабилизированная гепарином. Такой анализ используется для неонатального скрининга и лабораторного подтверждения галактоземии.
Гепарин предотвращает свертывание крови и при этом не оказывает выраженного хелатирующего действия на ионы, необходимые для корректного протекания ферментативной реакции, а также не вызывает существенного изменения матрицы образца. ЭДТА и цитрат, напротив, связывают двухвалентные катионы; цитрат дополнительно может приводить к разведению образца. Это способно подавлять активность фермента in vitro или нарушать условия тест-системы, создавая риск ложно низкого результата.
Снижение активности GALT характерно для классической галактоземии, однако изолированный результат скрининга не является окончательным диагнозом. При выявлении дефицита проводят количественное исследование активности в эритроцитах, определяют концентрацию галактозо-1-фосфата и при необходимости выполняют молекулярно-генетическое исследование гена GALT. Интерпретация затрудняется после недавнего переливания эритроцитарной массы, поскольку донорские клетки могут маскировать истинный дефицит фермента.
| Материал или условие | Пригодность для определения GALT | Диагностическое значение и ограничения |
|---|---|---|
| Пятно высушенной крови | Пригодно | Стандартный материал для неонатального скрининга; содержит эритроциты, в которых оценивают активность фермента. |
| Цельная кровь с гепарином | Пригодна | Предпочтительный материал для количественного анализа; сохраняет клеточную ферментативную активность при правильном хранении и транспортировке. |
| Цельная кровь с ЭДТА | Не рекомендуется | ЭДТА связывает ионы металлов и может ингибировать ферментативную реакцию или искажать работу аналитической системы, обычно в сторону занижения активности. |
| Цельная кровь с цитратом | Не рекомендуется | Возможны хелатирование катионов, изменение ионного состава и разведение образца; результат становится недостоверным. |
| Сыворотка или плазма без эритроцитов | Непригодны | GALT оценивается в эритроцитарной фракции, поэтому удаление клеток исключает получение информативного результата. |
| Недавнее переливание эритроцитов | Ограничение к интерпретации | Донорские эритроциты могут повысить измеренную активность и скрыть врожденный дефицит у обследуемого. |
| Сниженная активность GALT в скрининге | Требует подтверждения | Необходимы повторное или количественное исследование, оценка галактозо-1-фосфата и, при необходимости, анализ вариантов гена GALT; пороги зависят от метода и лабораторных референсов. |
Таким образом, правильный преаналитический выбор — пятно высушенной крови либо цельная кровь с гепарином. ЭДТА и цитрат не используют для этого исследования из-за риска химического и матричного влияния на ферментативную реакцию. Результат следует оценивать с учетом возраста, клинической картины, переливаний крови и особенностей применяемого метода. Окончательная верификация галактоземии основывается на совокупности ферментных, биохимических и генетических данных.