2) эритроциты
3) моноциты
4) лимфоциты (+)
Фитогемагглютинин (ФГА) является растительным лектином и классическим поликлональным митогеном, преимущественно стимулирующим Т-лимфоциты периферической крови. Связываясь с углеводными компонентами мембранных гликопротеинов и вызывая их перекрестное связывание, ФГА запускает внутриклеточные сигнальные каскады активации лимфоцита. Это приводит к бластной трансформации, синтезу интерлейкина-2 и экспрессии его рецептора, после чего покоящиеся клетки переходят из фазы G0 в клеточный цикл и начинают интенсивно пролиферировать.
Данное свойство лежит в основе использования ФГА при цитогенетическом исследовании лимфоцитов периферической крови. После стимуляции клетки активно проходят S-фазу и достигают митоза, что позволяет накапливать метафазные клетки для последующего кариотипирования и выявления хромосомных аномалий. Наиболее выраженный ответ характерен для Т-лимфоцитов; В-лимфоциты реагируют на ФГА значительно слабее и для их стимуляции применяются другие митогены.
Зрелые эритроциты не способны к делению, поскольку лишены ядра и полноценного аппарата синтеза ДНК. Нейтрофилы представляют собой терминально дифференцированные клетки с крайне ограниченным пролиферативным потенциалом, а циркулирующие моноциты преимущественно дифференцируются в макрофаги или дендритные клетки, а не вступают в активное митотическое деление под действием ФГА. Поэтому именно лимфоциты являются основной клеточной популяцией, используемой в ФГА-стимулированных культурах.
| Клеточная популяция | Способность к делению в периферической крови | Реакция на фитогемагглютинин | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| Т-лимфоциты | В покое находятся преимущественно в G0, но сохраняют высокий пролиферативный потенциал | Выраженная бластная трансформация и митотическая активность | Основной источник метафаз при стандартном кариотипировании крови |
| В-лимфоциты | Способны к пролиферации после специфической стимуляции | Ответ на ФГА значительно слабее, чем у Т-лимфоцитов | Для стимуляции применяют другие поликлональные активаторы |
| Моноциты | В периферической крови митотически малоактивны | Не являются основной пролиферирующей популяцией при воздействии ФГА | Преимущественно дифференцируются в тканевые макрофаги и дендритные клетки |
| Нейтрофилы | Терминально дифференцированы | Пролиферативного ответа на ФГА практически нет | Не используются для получения метафазных пластинок |
| Эритроциты | Зрелые клетки не имеют ядра и не делятся | Митогенный ответ отсутствует | Не могут служить объектом стандартного цитогенетического культивирования |
| ФГА-стимулированная культура крови | Преимущественно содержит пролиферирующие Т-лимфоциты | Активация клеточного цикла и накопление митозов | Применяется для анализа числа и структуры хромосом |
При стандартном цитогенетическом исследовании периферической крови культивирование обычно продолжают до получения достаточного количества делящихся лимфоцитов, после чего митоз блокируют на стадии метафазы с помощью ингибиторов веретена деления. Именно в метафазе хромосомы максимально конденсированы и наиболее пригодны для морфологического анализа. Недостаточный ответ лимфоцитов на митоген может приводить к малому числу метафаз и снижать информативность исследования. Таким образом, митогенное действие ФГА является ключевым лабораторным принципом получения материала для классического кариотипирования.