2) зрелости клеток с помощью антител к ядерным антигенам
3) происхождения клеток путем детекции мембранных антигенов с помощью флуоресцентно меченых антител (+)
4) прямого и бокового светорассеяния с последующей идентификацией и сортировкой клеток
Иммунофенотипированием называют исследование набора антигенов, экспрессируемых клеткой, с помощью специфических антител, чаще всего конъюгированных с флуорохромами. В клинической практике метод преимущественно выполняют методом проточной цитометрии: антитела связываются с мембранными или внутриклеточными антигенами, а прибор регистрирует интенсивность флуоресценции каждой клетки. Комбинация выявленных маркеров позволяет установить принадлежность клеток к определённой линии кроветворения, степень их дифференцировки и наличие аномального антигенного профиля.
Именно поэтому определение клеточного происхождения по мембранным антигенам с использованием флуоресцентно меченых антител является сущностью иммунофенотипирования. Например, CD3 характерен для Т-клеточной линии, CD19 и CD20 — для В-клеточной, CD13 и CD33 — для миелоидных клеток, CD34 — для ранних гемопоэтических предшественников. При лейкозах и лимфомах оценивают не только наличие отдельных маркеров, но и их сочетание, интенсивность экспрессии, коэкспрессию несоответствующих антигенов и признаки ограничения лёгких цепей иммуноглобулинов, что помогает выявлять клональную популяцию.
Прямое и боковое светорассеяние характеризуют размер клетки и её внутреннюю гранулярность, поэтому используются главным образом для построения гейтов и предварительного разделения клеточных популяций. Подсчёт клеток или их сортировка может быть частью проточной цитометрии, но не определяет понятие иммунофенотипирования. Антитела к ядерным антигенам также применяются в отдельных диагностических панелях, однако ключевым признаком метода остаётся специфическая антигенная идентификация клеток.
| Компонент исследования | Что определяется | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Прямое светорассеяние | Относительный размер клетки | Предварительное выделение лимфоцитов, моноцитов, гранулоцитов и крупных атипичных клеток |
| Боковое светорассеяние | Внутренняя сложность и зернистость клетки | Разграничение клеточных популяций и формирование гейтов |
| Мембранные CD-антигены | Линейная принадлежность и стадия созревания | Идентификация В-, Т-, NK-, миелоидных и других клеточных популяций |
| Внутриклеточные антигены | Цитоплазматические или ядерные белки | Уточнение дифференцировки при отсутствии специфических мембранных маркеров |
| Интенсивность флуоресценции | Относительный уровень экспрессии антигена | Выявление слабой, усиленной или аберрантной экспрессии |
| Коэкспрессия маркеров | Сочетание антигенов на одной клетке | Разграничение нормальных и опухолевых популяций, определение фенотипа бластов |
| Ограничение κ- или λ-цепей | Преимущественную экспрессию одной лёгкой цепи иммуноглобулина | Подтверждение клональности В-клеточной популяции |
Иммунофенотипирование особенно важно при диагностике острых лейкозов, лимфопролиферативных заболеваний и контроле минимальной остаточной болезни. Результат оценивают как многопараметрический профиль, а не как реакцию на один изолированный маркер. Интерпретация должна учитывать морфологию, клинические данные, цитогенетические и молекулярно-генетические исследования. Такой комплексный подход повышает точность классификации заболевания и выбора лечебной тактики.