2) взаимодействия антигена с антителом (+)
3) гидролиза
4) преципитации
Основой иммунологических методов служит высокоспецифическое связывание антигена с соответствующим антителом. Антитело распознаёт определённый участок антигена — эпитоп — с помощью антигенсвязывающего центра, или паратопа. Взаимодействие обеспечивается совокупностью нековалентных сил: электростатических, водородных, гидрофобных и ван-дер-ваальсовых связей. Специфичность этой реакции позволяет обнаруживать и количественно определять белки, гормоны, иммуноглобулины, инфекционные антигены, аутоантитела и другие биомаркеры.
Само образование комплекса антиген–антитело часто не регистрируется непосредственно, поэтому в лабораторных тестах используют различные системы визуализации сигнала: ферментные, флуоресцентные, хемилюминесцентные, радиоизотопные или турбидиметрические метки. Активация комплемента и преципитация также основаны на предварительном специфическом связывании антигена с антителом, но представляют лишь отдельные варианты проявления иммунной реакции. Гидролиз относится к химическому расщеплению соединений и не является универсальным принципом иммунодиагностики.
| Метод | Основной принцип | Способ регистрации | Типичное применение |
|---|---|---|---|
| Иммуноферментный анализ | Специфическое связывание антигена и антитела | Изменение окраски под действием ферментной метки | Определение антител, антигенов, гормонов и цитокинов |
| Иммунохемилюминесцентный анализ | Образование иммунного комплекса с меченым реагентом | Измерение интенсивности светового излучения | Высокочувствительное определение гормонов и онкомаркеров |
| Иммунофлуоресценция | Связывание флуорохром-меченого антитела с антигеном | Регистрация свечения в люминесцентном микроскопе | Диагностика аутоиммунных и инфекционных заболеваний |
| Иммуноблоттинг | Распознавание антителами отдельных антигенных фракций | Выявление специфических полос на мембране | Подтверждающая диагностика инфекций и аутоантител |
| Реакция преципитации | Формирование крупных комплексов растворимого антигена с антителом | Появление осадка или линии преципитации | Идентификация антигенов и оценка иммуноглобулинов |
| Реакция связывания комплемента | Фиксация комплемента сформированным иммунным комплексом | Оценка гемолиза в индикаторной системе | Классическая серологическая диагностика некоторых инфекций |
Диагностическая ценность иммунологических исследований определяется не только специфичностью антител, но и их аффинностью, то есть прочностью связывания с антигеном. На результат также влияют концентрация реагентов, наличие перекрёстно реагирующих веществ и так называемый матричный эффект исследуемого материала. Для повышения надёжности применяют контрольные образцы, калибраторы и подтверждающие тесты другого формата. Следовательно, взаимодействие антигена с антителом является универсальным молекулярным этапом, на котором построено большинство современных иммунодиагностических технологий.