2) аналитов, имеющих только один антигенсвязывающий центр (+)
3) антигенов только бактериальной природы
4) антител разных классов
Конкурентный ИФА основан на конкуренции между исследуемым, немеченым аналитом и его меченым аналогом за ограниченное количество участков связывания специфических антител. Чем выше концентрация аналита в образце, тем меньше меченого антигена связывается с антителами и тем слабее регистрируемый сигнал. Таким образом, для метода характерна обратная зависимость между интенсивностью окраски и содержанием определяемого вещества.
Этот формат особенно необходим для веществ, имеющих только одну антигенную детерминанту (эпитоп), то есть не позволяющих одновременно связаться с двумя различными антителами. К таким соединениям относятся многие низкомолекулярные антигены: стероидные гормоны, лекарственные препараты, наркотические вещества, токсины и некоторые метаболиты. В отличие от сэндвич -ИФА, где антиген должен иметь как минимум два доступных эпитопа, конкурентная схема не требует формирования комплекса захватывающее антитело — антиген — детектирующее антитело .
| Формат ИФА | Основной принцип | Предпочтительные объекты | Зависимость сигнала от концентрации |
|---|---|---|---|
| Конкурентный | Конкуренция исследуемого и меченого антигена за антитело | Гаптены и низкомолекулярные соединения с одним эпитопом | Обратная |
| Прямой | Меченое антитело непосредственно связывается с антигеном | Антигены в относительно простых биологических образцах | Прямая |
| Непрямой | Антиген фиксирован на поверхности, выявление проводят меченым вторичным антителом | Антитела сыворотки, включая оценку иммунного ответа | Прямая по отношению к содержанию антител |
| Сэндвич -ИФА | Антиген удерживается захватывающим и детектирующим антителами | Белки, цитокины, гормоны и другие многовалентные антигены | Прямая |
| Гомогенный конкурентный | Конкурентное взаимодействие регистрируется без этапа отмывки | Небольшие молекулы в автоматизированных анализаторах | Обычно обратная |
| Гетерогенный конкурентный | После связывания выполняется разделение свободной и связанной фракций | Гормоны, лекарственные средства, наркотики, метаболиты | Обратная |
Следовательно, ключевым критерием выбора конкурентной схемы является не бактериальное происхождение антигена и не принадлежность антител к определённому классу, а его молекулярное строение и число доступных эпитопов. Наличие единственного эпитопа делает невозможным полноценный двухантительный сэндвич . Результат конкурентного ИФА интерпретируют по калибровочной кривой, поскольку увеличение концентрации аналита сопровождается снижением оптической плотности.