2) углеводов
3) только ДНК
4) только белков (+)
Вестерн-блоттинг (иммуноблоттинг) применяется для анализа белков и основан на их предварительном разделении электрофорезом, чаще всего в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE). SDS денатурирует белковые молекулы и придаёт им близкий по величине отрицательный заряд, поэтому их миграция преимущественно зависит от молекулярной массы: низкомолекулярные белки проходят гель быстрее. После электрофореза белки переносят на мембрану из нитроцеллюлозы или PVDF.
Идентификация нужного белка проводится с помощью специфического первичного антитела и меченого вторичного антитела; сигнал регистрируют хемилюминесцентным, флуоресцентным или колориметрическим методом. Таким образом, метод сочетает разделение белков по электрофоретической подвижности с иммунологическим выявлением конкретного антигена. Нуклеиновые кислоты вестерн-блоттингом не исследуют: для ДНК используют Southern blotting, а для РНК — Northern blotting.
| Метод | Исследуемая молекула | Принцип выявления | Основной диагностический признак |
|---|---|---|---|
| Western blotting | Белки | Электрофорез, перенос на мембрану и иммунологическое выявление антителами | Полоса соответствующей молекулярной массы и специфический иммунный сигнал |
| Southern blotting | ДНК | Фрагментация, электрофорез, перенос на мембрану и гибридизация с меченым зондом | Сигнал комплементарного участка нуклеиновой кислоты |
| Northern blotting | РНК | Разделение РНК и гибридизация с комплементарным нуклеотидным зондом | Размер и относительное количество транскрипта |
| SDS-PAGE | Белки | Электрофоретическое разделение в денатурирующих условиях | Распределение белковых полос по молекулярной массе без обязательной идентификации белка |
| ELISA | Белки, антигены или антитела | Иммуноферментная реакция в лунке планшета | Интенсивность ферментативного сигнала пропорциональна концентрации аналита |
| Иммунофлуоресценция | Белки и другие антигенные структуры в клетках или тканях | Связывание флуоресцентно меченых антител с антигеном | Локализация антигена в клетке или тканевом срезе |
Следовательно, правильная характеристика вестерн-блоттинга — метод анализа и разделения белков. На достоверность результата влияют качество антител, контроль загрузки, наличие маркера молекулярной массы и оценка специфичности полосы. В клинической лабораторной диагностике иммуноблоттинг может использоваться для подтверждения наличия антител или отдельных белковых антигенов. Интерпретация проводится с учётом положительных и отрицательных контролей, а также диагностических порогов конкретной тест-системы.