2) диско-диффузионным (+)
3) серийных разведений
4) просветления бульона
Чувствительность бактерий к антибиотикам по диаметру зоны подавления роста определяют диско-диффузионным методом, или методом дисков Кирби—Бауэра. Стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма наносят на поверхность агара Мюллера—Хинтона, после чего размещают диски с известным содержанием антибиотиков. Препарат диффундирует в агар, формируя градиент концентрации; при достижении подавляющей рост концентрации вокруг диска возникает стерильная зона.
Результат оценивают по диаметру зоны задержки роста в миллиметрах. Полученное значение сопоставляют с клиническими пограничными значениями, установленными актуальными стандартами EUCAST или CLSI, с учетом вида микроорганизма, антибиотика, дозировки и локализации инфекции. По итогам изолят относят к категориям S — чувствительный при стандартном режиме экспозиции, I — чувствительный при увеличенной экспозиции, либо R — устойчивый.
Методы серийных разведений оценивают не диаметр зоны, а минимальную подавляющую концентрацию антибиотика — наименьшую концентрацию, полностью предотвращающую видимый рост культуры. Просветление бульона является визуальным признаком отсутствия роста в жидкой питательной среде и может использоваться при разведениях, но само по себе не представляет диско-диффузионный тест. Метод стерильного пятна также не является стандартизированным способом определения чувствительности по диаметру зоны.
| Метод | Материал и принцип | Основной результат | Практическая интерпретация |
|---|---|---|---|
| Диско-диффузионный метод | Диски с антибиотиками на засеянном агаре; препарат диффундирует в питательную среду | Диаметр зоны подавления роста, мм | Категория S, I или R по таблицам EUCAST/CLSI |
| Метод серийных разведений | Последовательное снижение концентрации антибиотика в бульоне или агаре | Минимальная подавляющая концентрация, МПК | Количественная оценка активности препарата; результат выражают обычно в мг/л |
| Микроразведение в бульоне | Микропланшет с рядом концентраций антибиотика и стандартизованной бактериальной суспензией | Отсутствие видимого помутнения в лунке с наименьшей эффективной концентрацией | Стандартизированный вариант определения МПК |
| Градиентно-диффузионный тест | Полоска с непрерывным градиентом концентраций антибиотика на поверхности агара | МПК по пересечению эллипса подавления с градуировкой полоски | Сочетает диффузионный принцип с количественным результатом |
| Просветление бульона | Визуальная оценка отсутствия мутности в жидкой культуре | Признак подавления роста при конкретной концентрации | Требует серии концентраций для определения МПК и контроля инокулюма |
| Методы без стандартизированной зоны ингибиции | Локальное нанесение культуры или реагента без валидированной методики диффузии антибиотика | Диаметр участка роста или его отсутствия не имеет унифицированного порога | Не используется для надежной категоризации чувствительности к антибиотикам |
Достоверность диско-диффузионного теста зависит от плотности инокулюма, состава и толщины агара, активности дисков, времени инкубации и условий культивирования. Обычно применяют суспензию, соответствующую стандарту 0,5 по Мак-Фарланду, и контролируют качество методики референсными штаммами. Диаметр зоны нельзя интерпретировать изолированно без учета стандарта и клинических пограничных значений. Метод позволяет быстро выбрать эффективные препараты, но при некоторых микроорганизмах и антибиотиках требуется подтверждение МПК или применение специальных тестов на резистентность.