2) Папаниколау
3) Романовскому
4) Граму
Отличить погибшие сперматозоиды от живых можно с помощью витальной окраски по Блюму. Метод основан на оценке целостности плазматической мембраны: у живых клеток мембрана сохраняет избирательную проницаемость и не пропускает эозин, поэтому они остаются неокрашенными или слабо окрашенными. У погибших сперматозоидов мембранный барьер нарушен, краситель проникает в клетку, и головка приобретает розовую или красную окраску.
Таким образом, метод по Блюму является не столько морфологическим, сколько функциональным тестом жизнеспособности. Результат выражают в процентах живых сперматозоидов; особенно важно учитывать время от получения эякулята до исследования, поскольку длительное ожидание приводит к вторичной утрате жизнеспособности. В отличие от этого, окраска по Папаниколау и метод Романовского преимущественно применяются для оценки формы, зрелости и клеточного состава эякулята, а окраска по Граму — для выявления бактерий и характеристики воспалительного процесса.
| Метод | Основной диагностический принцип | Возможность оценки жизнеспособности сперматозоидов |
|---|---|---|
| Окраска по Блюму | Проникновение эозина через повреждённую мембрану погибших клеток | Да; живые клетки не окрашиваются, погибшие окрашиваются в розово-красный цвет |
| Эозин-нигрозиновая окраска | Витальное окрашивание эозином с контрастированием тёмным фоном нигрозина | Да; применяется как распространённый вариант теста на жизнеспособность |
| Папаниколау | Полихромная окраска для оценки морфологии головки, шейки и жгутика, а также зрелости клеток | Нет; фиксация прекращает жизнедеятельность клеток |
| Романовский | Окрашивание клеточных структур, лейкоцитов и других форменных элементов эякулята | Не является стандартным методом оценки жизнеспособности |
| Грам | Дифференциация бактерий по свойствам клеточной стенки и выявление микробной обсеменённости | Нет; оценивает микроорганизмы, а не жизнеспособность сперматозоидов |
| Нативная микроскопия | Наблюдение движения сперматозоидов без фиксации и окраски | Позволяет оценить подвижность, но неподвижность не всегда означает гибель клетки |
Витальная окраска особенно полезна при выраженной астенозооспермии, когда необходимо отличить неподвижные, но жизнеспособные клетки от действительно погибших. Неподвижный сперматозоид с неповреждённой мембраной может сохранять оплодотворяющий потенциал, тогда как окрашивание эозином указывает на утрату мембранной целостности. Поэтому оценка жизнеспособности должна проводиться вместе с исследованием концентрации, подвижности и морфологии сперматозоидов.