2) высокоэффективная жидкостная хроматография (+)
3) нефелометрия
4) колоночная хроматография с катион-обменной смолой
Гликированный гемоглобин (HbA1c) образуется в результате неферментативного присоединения глюкозы к N-концевому валину β-цепи гемоглобина с формированием стабильного кетамина. Его концентрация отражает средний уровень гликемии преимущественно за предшествующие 8–12 недель. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) разделяет фракции гемоглобина по различиям в заряде и времени удерживания; долю HbA1c рассчитывают по площади соответствующего пика относительно общего гемоглобина.
ВЭЖХ обладает высокой аналитической специфичностью, воспроизводимостью и позволяет выявлять варианты гемоглобина, которые могут искажать результат. В международной системе стандартизации IFCC референсные процедуры основаны на высокоточных вариантах хроматографического анализа, включая ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием; рутинные системы ВЭЖХ калибруются с прослеживаемостью к этим процедурам. Поэтому в рамках тестового вопроса именно ВЭЖХ рассматривается как референсный метод.
Турбидиметрия и нефелометрия обычно используют иммунологическое распознавание HbA1c и измеряют изменение оптических свойств суспензии или рассеяние света; это стандартизованные рутинные подходы, но не эталонный метод. Обычная колоночная хроматография на катион-обменной смоле основана на сходном принципе разделения, однако без высокоэффективного режима уступает ВЭЖХ по разрешению, автоматизации и воспроизводимости. Интерпретацию HbA1c также необходимо сопоставлять с состоянием эритроцитов, поскольку гемолиз, недавняя трансфузия, кровопотеря, гемоглобинопатии и выраженное изменение продолжительности жизни эритроцитов могут приводить к недостоверным значениям.
| Подход | Аналитический принцип | Диагностическое значение и ограничения |
|---|---|---|
| Рутинная ВЭЖХ, чаще ионообменная | Разделение фракций гемоглобина по заряду и времени удерживания с регистрацией хроматограммы | Высокая специфичность и воспроизводимость; возможно выявление некоторых вариантов гемоглобина и аномальных пиков |
| Референсные процедуры IFCC | Высокоточное определение HbA1c с применением ВЭЖХ-масс-спектрометрии и других валидированных референсных технологий | Используются для установления прослеживаемости и стандартизации рутинных анализаторов |
| Обычная катион-обменная колоночная хроматография | Ионообменное разделение гемоглобинов в колонке без высокоэффективного режима | Исторически применимый метод; обычно уступает ВЭЖХ по разрешению, скорости и стабильности результатов |
| Иммунотурбидиметрия | Образование иммунных комплексов с антителами к HbA1c и изменение мутности раствора | Удобна для автоматизированной рутинной работы, но зависит от калибровки и возможных иммунологических интерференций |
| Нефелометрия | Измерение интенсивности света, рассеянного иммунными комплексами | Косвенный иммунологический метод; не обеспечивает характеристику хроматографического профиля гемоглобина |
| Боронатная аффинная хроматография | Связывание цис-диольных групп гликированных соединений с боронатным лигандом | Измеряет совокупную гликированную фракцию, но может иметь особенности специфичности и стандартизации |
| Факторы, искажающие HbA1c | Изменение продолжительности жизни эритроцитов или наличие структурных вариантов гемоглобина | Результат может не отражать реальную среднюю гликемию; необходимы альтернативы, например фруктозамин или гликемический профиль |
Результат HbA1c должен быть выражен в стандартизованных единицах NGSP и/или IFCC: процентах и ммоль/моль. Значение от 6,5% (48 ммоль/моль) используется как диагностический критерий сахарного диабета при подтверждении в повторном исследовании или наличии явной гипергликемии, а диапазон 5,7–6,4% соответствует повышенному риску диабета. При несоответствии HbA1c данным самоконтроля или симптомам следует исключать анемию, гемоглобинопатию и нарушения обмена эритроцитов. Таким образом, преимущество ВЭЖХ заключается не только в количественной точности, но и в возможности оценивать хроматографический профиль гемоглобина.