2) Ожешко
3) Нейссера (+)
4) Гинса
Зерна волютина, или метахроматические гранулы Бабеша—Эрнста, представляют собой внутриклеточные скопления неорганических полифосфатов. Они характерны прежде всего для коринебактерий, особенно Corynebacterium diphtheriae, и обычно располагаются полярно или субполярно. Метод Нейссера выявляет эти гранулы благодаря их интенсивному окрашиванию в тёмно-синий или сине-фиолетовый цвет, тогда как цитоплазма бактерии приобретает желтовато-коричневый оттенок.
Выявление полярных метахроматических гранул в сочетании с булавовидной формой клеток и характерным расположением в виде китайских иероглифов является важным ориентировочным признаком дифтерийных коринебактерий. Метахромазия обусловлена изменением спектра поглощения красителя при связывании с полифосфатами, поэтому гранулы окрашиваются иначе, чем основная масса цитоплазмы. Результат микроскопии по Нейссеру имеет диагностическое значение для первичного распознавания культуры, но не заменяет выделение возбудителя и подтверждение его токсигенности.
| Метод | Основная структура | Характер окрашивания | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| Нейссера | Метахроматические гранулы волютина | Гранулы тёмно-синие или сине-фиолетовые, тело бактерии желтовато-коричневое | Ориентировочное выявление коринебактерий и признаков, характерных для C. diphtheriae |
| Романовского—Гимзы | Клеточные и ядерные структуры, простейшие, форменные элементы крови | Дифференциальное окрашивание цитоплазмы, ядер и отдельных внутриклеточных включений | Исследование мазков крови, костного мозга, паразитологических и цитологических препаратов |
| Ожешко | Бактериальные эндоспоры | Споры контрастно окрашиваются относительно вегетативных клеток | Определение спорообразующих бактерий, включая представителей родов Bacillus и Clostridium |
| Гинса | Капсула микроорганизмов | Тёмный фон, клетка окрашена, капсула выявляется как светлый неокрашенный ореол | Обнаружение капсульных форм бактерий |
| Положительный признак при микроскопии коринебактерий | Полярные гранулы волютина и булавовидная форма клетки | Неравномерное окрашивание с выраженными полюсами | Предварительная дифференциация дифтерийных коринебактерий от непатогенных дифтероидов |
| Окончательное подтверждение дифтерии | Возбудитель и ген токсина | Культуральная идентификация, ПЦР или определение продукции токсина | Подтверждение клинически значимого токсигенного штамма |
Метод Нейссера особенно полезен при исследовании мазков из ротоглотки и первичной идентификации коринебактерий. Отсутствие гранул не исключает инфекцию, поскольку их выраженность зависит от условий культивирования, возраста культуры и состава питательной среды. Для дифференциации токсигенных и нетоксигенных штаммов необходимы молекулярные или токсикологические методы. При подозрении на дифтерию лабораторное исследование проводят без задержки, одновременно обеспечивая клиническую и противоэпидемическую оценку пациента.