2) нитроцефиновый тест (+)
3) вирусологический метод
4) фаготипирование
Для выявления β-лактамаз стафилококков применяют нитроцефиновый тест. Нитроцефин представляет собой хромогенный β-лактамный субстрат: при гидролизе β-лактамного кольца ферментом изменяется его структура и цвет индикатора — с жёлтого на розовый или красный. Появление окраски свидетельствует о наличии у штамма β-лактамазы, чаще всего пенициллиназы, разрушающей пенициллин и ряд других β-лактамных антибиотиков.
Метод отличается быстротой и простотой: исследуемую колонию стафилококка наносят на диск, полоску или лунку с нитроцефином и оценивают изменение цвета в течение нескольких минут. Биологическая проба не является стандартным быстрым способом рутинного обнаружения этого фермента, вирусологические методы к диагностике β-лактамаз не относятся, а фаготипирование предназначено для эпидемиологической характеристики и установления принадлежности штаммов к фаготипам.
| Метод или показатель | Основной принцип | Диагностический результат | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| Нитроцефиновый тест | Гидролиз хромогенного β-лактамного субстрата β-лактамазой | Изменение жёлтой окраски на розовую или красную | Быстрое выявление продукции β-лактамазы, прежде всего пенициллиназы |
| Определение чувствительности к бензилпенициллину | Оценка роста стафилококка в присутствии антибиотика | Зона задержки роста или её отсутствие | Фенотипическая оценка устойчивости; зависит от условий постановки и критериев интерпретации |
| Определение PBP2a | Выявление изменённого пенициллин-связывающего белка | Положительная реакция на PBP2a | Подтверждает метициллинорезистентность, связанную главным образом с mecA или mecC |
| ПЦР на mecA/mecC | Амплификация генов, кодирующих механизм устойчивости к метициллину | Обнаружение специфической нуклеотидной последовательности | Молекулярное подтверждение MRSA; не заменяет выявление β-лактамазы |
| Фаготипирование | Определение чувствительности штамма к панели бактериофагов | Фаготип или профиль лизиса | Эпидемиологическое типирование, а не определение ферментативной лекарственной устойчивости |
| Вирусологический метод | Исследование вирусов или вирусных компонентов | Выявление вирусного агента либо его маркеров | Не применяется для обнаружения бактериальных β-лактамаз |
Положительный нитроцефиновый тест указывает на ферментативное разрушение β-лактамного антибиотика и обычно сопровождается устойчивостью к бензилпенициллину. Отрицательный результат не исключает устойчивость стафилококка, обусловленную изменением мишени антибиотика, например PBP2a при MRSA. Поэтому окончательная интерпретация должна основываться на сочетании нитроцефинового теста, фенотипического определения чувствительности и, при необходимости, молекулярных или иммунологических методов.