2) путем пассажа на дифференциальных средах в трубках Дунбара
3) с использованием синтетических жидких сред внутрилабораторного изготовления
4) с использованием биохимических панелей или автоматических анализаторов (+)
Ассимиляция углеводов и многоатомных спиртов у дрожжевых грибов — это способность использовать определённое соединение как единственный источник углерода для аэробного роста. В лунках или микрокамерах биохимической панели находятся отдельные субстраты на фоне базовой питательной среды; положительной реакцией считают появление роста, обычно регистрируемого по помутнению или изменению оптической плотности. В отличие от ферментации, при ассимиляции оценивают именно образование клеточной биомассы, а не выделение газа или закисление среды.
Современная идентификация дрожжей основана на стандартизованных коммерческих панелях и автоматических анализаторах, содержащих наборы углеводов и полиолов, например глюкозу, мальтозу, сахарозу, лактозу, раффинозу, инозитол и другие субстраты. Полученный профиль положительных и отрицательных реакций сопоставляется с компьютерной базой данных и позволяет определить вид или наиболее вероятный таксономический комплекс гриба. Такой подход обеспечивает воспроизводимость, контролируемый состав сред и объективную регистрацию результатов, поэтому является правильным для современного этапа лабораторной диагностики.
Методы на минимальном агаре, последовательные пассажи в пробирках и самостоятельно приготовленные жидкие среды имеют главным образом историческое или вспомогательное значение. Их результаты сильнее зависят от состава среды, стандартизации инокулюма, длительности инкубации и субъективной оценки роста. При интерпретации панелей необходима чистая культура, контроль качества и учёт того, что фенотипические реакции могут изменяться у отдельных штаммов; при сомнительном результате идентификацию подтверждают масс-спектрометрией MALDI-TOF или молекулярными методами.
| Подход | Принцип | Регистрация результата | Диагностическая ценность и ограничения |
|---|---|---|---|
| Биохимическая панель для дрожжей | Набор отдельных лунок с субстратами, каждый из которых является потенциальным единственным источником углерода | Рост в лунке: помутнение, изменение оптической плотности или индикаторной реакции | Формирует стандартизованный профиль ассимиляции для видовой идентификации |
| Автоматический анализатор | Инкубация панели и последовательное оптическое считывание биохимических реакций | Результаты интерпретируются программой по базе данных референсных профилей | Снижает субъективность и ускоряет выдачу заключения; точность зависит от качества базы данных |
| Положительная ассимиляция | Гриб использует субстрат для аэробного роста и синтеза клеточных компонентов | Рост выше уровня отрицательного контроля | Оценивается в составе всего профиля, а не как изолированный признак |
| Отрицательная ассимиляция | Субстрат не поддерживает заметного роста в заданных условиях | Отсутствие различимого увеличения биомассы | Помогает дифференцировать близкородственные виды и виды одного комплекса |
| Ассимиляция и ферментация | Ассимиляция отражает рост на субстрате, ферментация — анаэробное расщепление с образованием кислоты и/или газа | Для ферментации используют газообразование и изменение pH, для ассимиляции — рост | Признаки не являются взаимозаменяемыми и могут давать разные профили |
| Старые культуральные методы | Рост на минимальном агаре или в последовательно используемых жидких средах | Чаще визуальная оценка колоний или помутнения | Менее стандартизованы, трудоёмки и применяются преимущественно при отсутствии коммерческих систем |
| Подтверждение идентификации | Сопоставление фенотипического результата с независимым методом | MALDI-TOF MS, ПЦР или секвенирование | Особенно важно при редких видах, смешанной культуре и несоответствии биохимического профиля клинической картине |
Таким образом, ключевым диагностическим критерием является характерный набор ассимиляционных реакций, а не единичное использование конкретного углевода. Биохимические панели позволяют исследовать большое число субстратов одновременно в унифицированных условиях. Автоматизация повышает воспроизводимость и уменьшает влияние субъективной оценки. Результат следует интерпретировать с учётом морфологии культуры, клинического материала и возможности подтверждающей идентификации.