2) положительно (+)
3) метахроматически
4) вариабельно
Микромицеты при окраске по Граму окрашиваются положительно: клеточная стенка грибов содержит многослойный каркас из хитина, β-глюканов и маннопротеинов, который удерживает комплекс кристаллического фиолетового с йодом. При обработке спиртом или ацетоном стенка обезвоживается, ее поры уменьшаются, и краситель сохраняется в клетке. Это физико-химическое свойство не связано с наличием пептидогликана: у грибов его нет, поэтому грамположительность микромицетов не означает их принадлежность к грамположительным бактериям.
В мазках грамположительно выявляются дрожжевые клетки, псевдогифы и элементы истинного мицелия; они приобретают фиолетовую или фиолетово-синюю окраску. Метод позволяет быстро обнаружить грибковые элементы непосредственно в клиническом материале, но не всегда дает возможность установить вид возбудителя. Слабая, неравномерная или кажущаяся вариабельной окраска обычно обусловлена возрастом культуры, повреждением клеточной стенки, чрезмерным обесцвечиванием, слишком толстыми мазками или иными методическими нарушениями.
| Объект | Окраска по Граму | Морфологический признак | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Дрожжевые клетки | Фиолетовая, грамположительная | Овальные или округлые клетки, иногда с почкованием | Поддерживает наличие дрожжеподобного гриба, например Candida spp. |
| Псевдогифы | Фиолетовая | Цепочки удлиненных почкующихся клеток с перетяжками | Характерный признак некоторых Candida spp. в клиническом материале |
| Истинные гифы | Фиолетовая, иногда неравномерная | Нити с параллельными стенками, возможными перегородками | Указывает на мицелиальную форму плесневого или диморфного гриба |
| Конидии и споры | Обычно фиолетовая | Округлые или овальные репродуктивные элементы | Могут дополнять оценку морфологии, но редко достаточны для видовой идентификации |
| Молодая культура | Интенсивно грамположительная | Хорошо сохраняющаяся клеточная стенка | Наиболее благоприятна для выявления грибковых элементов |
| Старая или поврежденная культура | Бледная, фрагментарная | Неравномерное окрашивание, разрушение клеток | Требует исключения артефактов и подтверждения другими методами |
| Бактериальные клетки в том же мазке | Грамположительные или грамотрицательные | Мелкие кокки или палочки, в отличие от крупных грибковых элементов | Помогают оценить смешанную инфекцию и дифференцировать сопутствующую бактериальную флору |
Результат окраски по Граму следует интерпретировать вместе с размером, формой и расположением грибковых элементов. Для подтверждения микоза применяют прямую микроскопию с гидроксидом калия, культуральное исследование, MALDI-TOF-масс-спектрометрию или молекулярные методы. При подозрении на инвазивную инфекцию дополнительно оценивают гистологические препараты и специфические биомаркеры, включая галактоманнан и β-D-глюкан. Грамокраска является ориентировочным быстрым методом и не заменяет видовую идентификацию и определение клинической значимости изолята.