2) миелограмму, трепанобиопсию
3) определение специфических антигенов и антител
4) реакцию иммунофлюоресценции
Цитохимическое исследование и иммунофенотипирование необходимы для определения линейной принадлежности бластных клеток и варианта острого лейкоза. Цитохимические реакции выявляют ферменты и внутриклеточные компоненты, характерные для определённых направлений дифференцировки: миелопероксидаза и суданофильные липиды подтверждают миелоидную природу бластов, неспецифическая эстераза указывает на моноцитарную дифференцировку, а PAS-реакция может дополнять характеристику лимфобластов. Эти методы особенно важны при морфологически сходных или недифференцированных бластных популяциях.
Иммунофенотипирование методом многоцветной проточной цитометрии определяет экспрессию мембранных и цитоплазматических антигенов. Выявление CD19, CD79a и цитоплазматического CD22 поддерживает В-линейную принадлежность; цитоплазматический или поверхностный CD3 — Т-линейную; миелопероксидаза, CD13, CD33 и CD117 — миелоидную. Совокупность маркеров позволяет различить острый лимфобластный и острый миелоидный лейкоз, диагностировать лейкоз смешанного фенотипа, оценить степень зрелости бластов и сформировать индивидуальный лейкоз-ассоциированный иммунофенотип для последующего контроля минимальной остаточной болезни.
Миелограмма и трепанобиопсия характеризуют клеточный состав, степень бластной инфильтрации и архитектонику костного мозга, поэтому имеют большое значение на этапе подтверждения гемобластоза. Однако без цитохимической и иммунологической характеристики они не всегда позволяют достоверно установить происхождение морфологически однотипных бластов. Определение инфекционных антигенов, антител и неспецифическая реакция иммунофлюоресценции не решают основную задачу классификации острого лейкоза.
| Диагностический подход | Основные признаки | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Морфологическое исследование | Размер бластов, структура хроматина, ядрышки, зернистость, палочки Ауэра | Выявляет бластную популяцию и позволяет предположить вариант лейкоза |
| Цитохимия миелопероксидазы | Положительная реакция в миелоидных бластах | Подтверждает миелоидную дифференцировку |
| Реакция с неспецифической эстеразой | Ферментативная активность в клетках моноцитарного ряда | Помогает диагностировать миеломоноцитарные и моноцитарные варианты |
| Иммунофенотип В-линии | CD19, CD79a, CD22, часто CD10 и TdT | Подтверждает В-лимфобластный лейкоз |
| Иммунофенотип Т-линии | Цитоплазматический или поверхностный CD3, CD7, часто TdT | Подтверждает Т-лимфобластный лейкоз |
| Миелоидный иммунофенотип | Миелопероксидаза, CD13, CD33, CD117 | Поддерживает диагноз острого миелоидного лейкоза |
| Смешанный фенотип | Одновременное наличие строго определённых маркеров нескольких линий | Позволяет диагностировать острый лейкоз смешанного фенотипа |
После установления линейной принадлежности бластов диагностический поиск дополняют цитогенетическими и молекулярно-генетическими исследованиями. Они выявляют хромосомные перестройки и мутации, определяющие современную классификацию, прогноз и выбор протокола терапии. Первичный иммунофенотип также служит ориентиром при оценке ответа на лечение. У детей комплексная характеристика опухолевого клона необходима для точной стратификации риска и индивидуализации интенсивности противолейкозной терапии.