2) делает невозможным проведение молекулярно-генетического исследования
3) делает невозможным проведение проточной цитофлуориметрии
4) затрудняет адекватную интерпретацию агрегатограмм (+)
Тромбоцитопения затрудняет интерпретацию агрегатограмм, поскольку результаты большинства методов агрегометрии зависят не только от функциональной активности, но и от количества тромбоцитов в исследуемом образце. При световой трансмиссионной агрегометрии регистрируют увеличение светопропускания богатой тромбоцитами плазмы после добавления агониста. Низкая концентрация клеток уменьшает исходную оптическую плотность, частоту межтромбоцитарных контактов и образование крупных агрегатов, поэтому амплитуда и скорость агрегации могут искусственно снижаться.
Полученная гипоагрегация не всегда отражает истинную тромбоцитопатию: снижение максимальной амплитуды, сглаживание вторичной волны или усиление дезагрегации могут быть следствием малого числа клеток. Поэтому результат необходимо сопоставлять с количеством тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме, морфологией клеток, лекарственным анамнезом и лабораторными референсами. В отдельных случаях исследование сохраняет диагностическую ценность, например для выявления выраженных дефектов, однако нормальные и умеренно изменённые кривые при тромбоцитопении требуют особенно осторожной оценки.
Тромбоцитопения не является основанием для отказа от всех функциональных методов. Проточная цитофлуориметрия исследует отдельные клетки и позволяет оценивать экспрессию мембранных гликопротеинов, связывание фибриногена, экспозицию P-селектина и другие маркеры активации даже при существенно сниженном количестве тромбоцитов, если зарегистрировано достаточное число событий. Молекулярно-генетический анализ обычно выполняют по ДНК лейкоцитов периферической крови или другого клеточного материала, поэтому количество тромбоцитов непосредственно не ограничивает его проведение.
| Метод или этап диагностики | Влияние тромбоцитопении | Практическое значение |
|---|---|---|
| Общий анализ крови и мазок периферической крови | Позволяют подтвердить истинное снижение количества тромбоцитов и выявить агрегаты, микро- или макротромбоциты | Необходимы для исключения псевдотромбоцитопении и выбора последующих исследований |
| Световая трансмиссионная агрегометрия | Амплитуда, наклон кривой и вторичная волна зависят от концентрации тромбоцитов в плазме | При низком количестве клеток возможна ложная картина гипоагрегации |
| Импедансная агрегометрия цельной крови | Уменьшается число тромбоцитов, способных осаждаться на электродах | Сниженный сигнал может отражать количественный, а не качественный дефект |
| Проточная цитофлуориметрия | Относительно мало зависит от концентрации клеток, поскольку анализ проводится на уровне отдельного тромбоцита | Подходит для оценки рецепторов GPIIb/IIIa, GPIb/IX/V, дегрануляции и активации |
| Исследование секреции гранул | При крайне низком количестве клеток возможно уменьшение суммарного выделения АДФ или АТФ | Результат следует нормировать и сопоставлять с показателями агрегометрии и цитофлуориметрии |
| Анализ времени закрытия апертуры PFA | Тромбоцитопения и анемия существенно удлиняют время закрытия | При выраженном снижении числа тромбоцитов метод неспецифичен для диагностики тромбоцитопатии |
| Молекулярно-генетическое исследование | Количество тромбоцитов не влияет на получение ДНК из лейкоцитов или буккального эпителия | Применяется для подтверждения наследственных тромбоцитопений и синдромальных форм |
При обследовании пациента с кровоточивостью количественный и функциональный дефекты тромбоцитов необходимо разграничивать, но они могут существовать одновременно. Выбор метода определяется предполагаемым заболеванием, выраженностью тромбоцитопении и возможностями специализированной лаборатории. При интерпретации агрегатограмм предпочтительно использовать сопоставимый по количеству тромбоцитов контроль и учитывать все преаналитические факторы. Окончательное заключение формируют по совокупности клинического фенотипа, мазка крови, функциональных тестов, иммунного фенотипирования и генетических данных.