2) более сложен в проведении
3) более дорог в проведении
4) обладает более низкой чувствительностью (+)
При оценке минимальной остаточной болезни (МОБ) при остром лимфобластном лейкозе проточная цитометрия выявляет лейкозные клетки по их патологическому иммунофенотипу: сочетанию экспрессии антигенов, интенсивности их экспрессии и наличию аберрантных популяций. Метод обычно позволяет обнаружить примерно одну опухолевую клетку среди 104 нормальных, то есть достигает чувствительности около 10−4; результат существенно зависит от объема исследованного костного мозга, качества образца, гемодилюции и сохранности характерного иммунофенотипа.
Количественная ПЦР определяет молекулярный маркер опухолевого клона — реаранжangement генов иммуноглобулинов или T-клеточного рецептора, а также специфический транскрипт при отдельных генетических вариантах лейкоза, например BCR::ABL1. При наличии информативной мишени и правильно разработанной системы праймеров метод обычно достигает чувствительности 10−5–10−6, поэтому способен выявлять меньшую опухолевую нагрузку. Именно более высокий порог обнаружения проточной цитометрии по сравнению с количественной ПЦР обосновывает отмеченное утверждение.
Преимуществами проточной цитометрии являются быстрое получение результата и одновременная оценка нескольких антигенов на отдельных клетках, однако метод требует достаточного числа жизнеспособных клеток и опыта интерпретации. Количественная ПЦР, напротив, более чувствительна и хорошо пригодна для стандартизованного динамического мониторинга, но требует предварительного выявления и подтверждения подходящего молекулярного маркера, а также специализированных реагентов.
| Критерий | Многоцветная проточная цитометрия | Количественная ПЦР |
|---|---|---|
| Принцип | Выявление клеток с аберрантным иммунофенотипом по набору поверхностных и внутриклеточных антигенов | Амплификация и количественная оценка клон-специфической нуклеотидной последовательности или транскрипта |
| Типичная чувствительность | Около 10−4; в оптимизированных лабораториях может приближаться к 10−5 | Обычно 10−5–10−6 при наличии валидированной молекулярной мишени |
| Что является единицей обнаружения | Фенотипически аномальная клеточная популяция | Копии специфической ДНК или РНК опухолевого клона |
| Основные требования к образцу | Свежий качественный костный мозг с достаточным количеством жизнеспособных клеток и минимальной гемодилюцией | Достаточное количество качественной ДНК или РНК и заранее установленная информативная мишень |
| Основные источники ошибок | Гемодилюция, низкая клеточность, изменение иммунофенотипа, перекрытие с нормальными предшественниками | Неподходящая или нестабильная молекулярная мишень, вариабельность эффективности амплификации, техническая контаминация |
| Стандартизация и мониторинг | Зависят от панели антител, стратегии гейтирования, оборудования и квалификации лаборатории | Высокая воспроизводимость при использовании валидированных праймеров, стандартов и международных протоколов |
| Практическая особенность | Позволяет одновременно оценить количество клеток и их иммунофенотип, результат доступен относительно быстро | Обеспечивает более глубокое выявление МОБ, но исследование часто требует пациент-специфической настройки |
Отрицательный результат проточной цитометрии не всегда означает полное отсутствие опухолевых клеток, а отражает их уровень ниже аналитического порога метода. Для корректной оценки МОБ необходимо учитывать время забора материала, качество аспирата и методологию конкретной лаборатории. При расхождении результатов проточной цитометрии и ПЦР требуется оценивать информативность молекулярного маркера и вероятность гемодилюции образца. Интерпретация МОБ должна проводиться в совокупности с клиническими данными и этапом терапии.