2) ПЦР
3) антиген-антитело (+)
4) in-situ гибридизации
В контексте биомаркерных исследований, учитываемых при стадировании по AJCC 8-го пересмотра, отмеченный ответ соответствует иммуногистохимическому методу. Его основа — специфическое связывание антитела с антигеном, то есть с определённым белком в опухолевой клетке. Связанный первичный антителом комплекс выявляют с помощью ферментной цветной реакции или флуоресцентной метки; результат оценивают по интенсивности окрашивания, проценту позитивных клеток и характеру внутриклеточной локализации.
Иммуногистохимия имеет принципиальное значение для определения экспрессии ER, PR и HER2 при раке молочной железы, p16 как суррогатного маркера HPV-ассоциированного рака ротоглотки, а также белков системы репарации неспаренных оснований при подозрении на микросателлитную нестабильность. Полученные данные могут влиять на прогностическую группу и выбор лечебной тактики. При этом в строгом смысле иммуногистохимия не является исследованием последовательности ДНК: она оценивает белковый продукт гена. Поэтому термин геномные тесты в формулировке следует понимать расширенно — как комплекс молекулярно-биомаркерных исследований, применяемых в современных классификациях опухолей.
Другие методы используют иные физико-химические принципы. ПЦР и секвенирование анализируют нуклеиновые кислоты посредством амплификации или определения последовательности, а in situ-гибридизация выявляет комплементарные участки ДНК или РНК непосредственно в клетке. Спектрофотометрия измеряет оптические характеристики образца и сама по себе не обеспечивает специфического распознавания опухолевого белка. Для HER2, например, иммуногистохимия оценивает гиперэкспрессию белка, а при сомнительном результате назначают in situ-гибридизацию для подтверждения амплификации гена.
| Метод | Основной объект исследования | Механизм | Примеры диагностического применения | Ключевая особенность |
|---|---|---|---|---|
| Иммуногистохимия | Белки и антигены клеток | Специфическая реакция антиген–антитело с ферментной или флуоресцентной визуализацией | ER, PR, HER2, p16, белки MMR | Показывает экспрессию белка и его локализацию в ткани |
| ПЦР | ДНК или РНК | Амплификация выбранного участка нуклеиновой кислоты праймерами | Выявление мутаций, вирусной ДНК/РНК, транслокаций | Высокая аналитическая чувствительность, но обычно без оценки тканевой локализации |
| Секвенирование нового поколения | Множество участков генома | Массивное параллельное определение последовательности нуклеотидов | Панели соматических мутаций, копийных нарушений и генов слияния | Позволяет одновременно исследовать большое число генов |
| In situ-гибридизация | ДНК или РНК в клетках и тканевых срезах | Гибридизация меченого зонда с комплементарной нуклеотидной последовательностью | Амплификация HER2, вирусные последовательности, некоторые транслокации | Сочетает молекулярную специфичность с сохранением морфологического контекста |
| Спектрофотометрия | Оптические свойства раствора или образца | Измерение поглощения или пропускания света на определённой длине волны | Оценка концентрации веществ, контроль качества экстрактов | Не основана на специфическом распознавании конкретного антигена |
| Комбинированная стратегия | Белковый и генетический уровни | Последовательное применение ИГХ и молекулярного подтверждающего теста | HER2: ИГХ с последующей ISH при сомнительном результате | Повышает точность классификации и клинической стратификации опухоли |
Таким образом, реакция антиген–антитело является фундаментом иммуногистохимической части биомаркерной диагностики, включаемой в современные онкологические классификации. Она позволяет связать морфологическую картину опухоли с экспрессией клинически значимых белков. Генетические изменения при необходимости подтверждают ПЦР, секвенированием или in situ-гибридизацией. Корректный выбор метода зависит от того, требуется ли определить белковую экспрессию, нуклеотидную последовательность, амплификацию гена или клеточную локализацию молекулярного маркера.