2) метиленовым синим
3) по Гомори (+)
4) по Граму – Вейгерту
Наиболее полно клетки Histoplasma capsulatum выявляются при окраске по Гомори, обычно подразумевается метод Гомори—Грокотта с метенамином серебра (GMS). Реакция основана на выявлении полисахаридов клеточной стенки грибов: после окисления углеводных компонентов на них восстанавливается металлическое серебро, поэтому стенка возбудителя окрашивается в чёрный или тёмно-коричневый цвет на контрастном фоне. Метод обладает высокой чувствительностью и хорошо выявляет единичные элементы гриба в тканях и в препаратах-отпечатках.
Морфологически гистоплазмы представляют собой мелкие округлые или овальные дрожжеподобные клетки размером примерно 2–4 мкм с узким почкованием. В тканях они обычно располагаются внутриклеточно, преимущественно в макрофагах, и могут создавать впечатление светлого перицеллюлярного ободка, напоминающего капсулу; истинной выраженной капсулы, как у Cryptococcus, нет. Окраска по Цилю—Нильсену предназначена прежде всего для кислотоустойчивых микобактерий, метиленовый синий даёт неспецифическое окрашивание, а метод Грама—Вейгерта может выявлять грибковые элементы, но обычно уступает серебрению по контрастности и полноте обнаружения.
| Метод | Вид возбудителя | Диагностическое значение | Основное ограничение |
|---|---|---|---|
| Гомори—Грокотт (GMS) | Чёткие чёрные клеточные стенки мелких дрожжевых клеток | Наиболее чувствительное выявление грибов в срезах и отпечатках, включая единичные внутриклеточные элементы | Не позволяет надёжно определить вид гриба только по морфологии |
| Периодическая кислотность—Шифф (PAS) | Грибковые клетки окрашиваются в розово-пурпурные тона | Подтверждает наличие грибковых структур и хорошо демонстрирует их стенки | Обычно менее контрастна при малом количестве возбудителя, чем GMS |
| Грам—Вейгерт | Дрожжеподобные клетки могут окрашиваться в фиолетовые тона | Дополнительный метод обнаружения грибов в тканях | Интенсивность окрашивания вариабельна, мелкие клетки гистоплазмы могут быть малозаметны |
| Циль—Нильсен | Микобактерии окрашиваются в красный цвет | Применяется для дифференциального поиска кислотоустойчивых бактерий | Не является оптимальной окраской для выявления Histoplasma |
| Метиленовый синий | Ядерные и цитоплазматические структуры окрашиваются неспецифически | Может ориентировочно показать клеточные элементы и воспалительный фон | Недостаточная специфичность и контрастность для мелких грибковых клеток |
| Культуральное исследование и ПЦР | Выделение культуры или обнаружение ДНК Histoplasma | Подтверждают этиологическую принадлежность возбудителя | Требуют специального материала, времени и соблюдения мер биологической безопасности |
Обнаружение мелких внутриклеточных дрожжевых клеток при GMS в сочетании с гранулематозным или макрофагальным воспалением поддерживает диагноз гистоплазмоза. Морфологическую картину необходимо сопоставлять с клиническими данными, эпидемиологическим анамнезом и результатами культурального или молекулярного исследования. При тяжёлых диссеминированных формах особенно важно отличать гистоплазмы от Leishmania, Cryptococcus и других мелких внутриклеточных микроорганизмов.