2) антиген-антитело (+)
3) восстановления
4) полимеразная цепная
Иммуногистохимия основана на специфическом взаимодействии антигена и антитела. Исследуемый белок в ткани выступает в роли антигена, а первичное антитело избирательно связывается с определённым эпитопом его молекулы. Благодаря этому можно установить не только наличие белка, но и его внутриклеточную или внеклеточную локализацию, что имеет значение для диагностики опухолей, оценки дифференцировки и определения прогностических маркеров.
Визуализация комплекса антиген—антитело обычно осуществляется с помощью вторичного антитела, связанного с ферментом, например пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. После добавления хромогена в месте реакции формируется окрашенный продукт; при флуоресцентной иммуногистохимии сигнал создаётся флуорохромом. Интенсивность и характер окрашивания оценивают с учётом локализации, фонового сигнала и результатов положительных и отрицательных контролей.
Другие перечисленные методы имеют иные мишени или механизмы. Полимеразная цепная реакция выявляет участки ДНК или РНК, а не белковые молекулы; реакции восстановления и связывания комплемента не являются базовым принципом иммуногистохимического обнаружения белков. Поэтому ключевым диагностическим принципом метода служит иммунологическое распознавание антигена специфическим антителом.
| Метод или вариант реакции | Что выявляется | Механизм формирования сигнала | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| Прямая иммуногистохимия | Белковый антиген в срезе ткани | Меченое первичное антитело непосредственно связывается с антигеном | Быстрое исследование, но обычно меньшая чувствительность |
| Непрямая иммуногистохимия | Белковый антиген в срезе ткани | Первичное антитело связывает антиген, вторичное меченое антитело — первичное антитело | Повышение чувствительности за счёт усиления сигнала |
| Полимерная ферментная система | Антигенные белки клеток и тканей | Комплекс вторичных антител и ферментного полимера превращает хромоген в окрашенный продукт | Наиболее распространённый вариант рутинной ИГХ |
| Иммунофлуоресценция | Белки, иммуноглобулины, компоненты комплемента | Свечение флуорохрома, связанного с антителом, при возбуждении определённой длиной волны | Диагностика заболеваний почек, кожи, аутоиммунных и иммунокомплексных процессов |
| Полимеразная цепная реакция | ДНК или РНК | Амплификация специфического участка нуклеиновой кислоты | Выявление генетических изменений и инфекционных агентов, но не непосредственная оценка белка |
| Гистохимическая реакция без антител | Химические группы или вещества в ткани | Реакция субстрата с компонентом ткани по химическим, а не иммунологическим свойствам | Окраска гликогена, муцина, липидов и других структур без антигенной специфичности |
Интерпретация иммуногистохимического результата включает оценку интенсивности окрашивания, доли позитивных клеток и характера распределения маркера. Для достоверности необходимы внутренние и внешние контроли, поскольку отсутствие сигнала может быть связано как с отсутствием белка, так и с техническими причинами. В онкоморфологии панель антител подбирают с учётом морфологической картины и предполагаемого происхождения опухоли. Таким образом, ИГХ позволяет связать морфологические признаки с молекулярным фенотипом клеток.