2) ДОПА-реакция (+)
3) гематоксилин-эозин
4) судан черный
ДОПА-реакция является гистохимическим методом выявления меланогенеза и потому считается специфичной для клеток, обладающих тирозиназной активностью. В тканях L-ДОФА (3,4-дигидроксифенилаланин) превращается под действием тирозиназы в ДОФА-хинон, а затем в меланин. В результате в меланоцитах и меланин-продуцирующих клетках появляются коричнево-чёрные гранулы, интенсивность окраски которых отражает функциональную активность меланогенеза.
Положительная ДОПА-реакция характерна для меланоцитов, клеток меланомы и других элементов, сохраняющих способность синтезировать меланин. Метод выявляет прежде всего активную тирозиназу, а не только уже накопившийся пигмент, поэтому при низкой ферментативной активности или выраженной фиксации реакция может быть слабой либо отрицательной. В практической диагностике её результаты оценивают совместно с морфологией и, при необходимости, с иммуногистохимическим исследованием маркеров меланоцитарной дифференцировки.
Остальные методы не обладают такой специфичностью к меланогенезу: берлинская лазурь выявляет трёхвалентное железо, гематоксилин-эозин обеспечивает обзорную окраску тканей, а судан чёрный преимущественно окрашивает липиды и некоторые липофусциноподобные пигменты. Поэтому именно ДОПА-реакция является правильным выбором при необходимости подтвердить наличие функционально активных меланинобразующих клеток.
| Метод | Основная мишень | Характер окраски или результат | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| ДОПА-реакция | Тирозиназа и активный меланогенез | Коричнево-чёрные гранулы в меланоцитах и меланин-продуцирующих клетках | Выявление функционально активных меланоцитов и клеток меланомы |
| Берлинская лазурь | Трёхвалентное железо, преимущественно в гемосидерине | Синие или сине-зелёные гранулы | Диагностика гемосидероза, кровоизлияний и нарушений обмена железа |
| Гематоксилин-эозин | Ядерные и цитоплазматические структуры клеток | Сине-фиолетовая окраска ядер и розовая окраска цитоплазмы | Общая морфологическая оценка, но не специфическое выявление меланина |
| Судан чёрный B | Нейтральные липиды, фосфолипиды и часть липофусциноподобных включений | Чёрное окрашивание жировых капель и некоторых пигментных гранул | Исследование липидов; недостаточная специфичность для меланина |
| Метод Фонтаны—Массона | Восстанавливающие свойства меланина и некоторых аргентаффинных веществ | Чёрное или тёмно-коричневое окрашивание гранул | Подтверждение наличия меланина, но возможны неспецифические результаты |
| Иммуногистохимия S-100, SOX10, Melan-A | Белки меланоцитарной дифференцировки | Коричневое окрашивание клеток при использовании хромогена | Подтверждение меланоцитарной природы опухоли и оценка распространённости клеток |
ДОПА-реакция особенно информативна при сохранённой активности тирозиназы, поскольку отражает не только наличие пигмента, но и способность клетки к его синтезу. Отрицательный результат не исключает меланоцитарное происхождение опухоли при утрате ферментативной активности. Для окончательной диагностики меланомы учитывают клеточную атипию, инвазивный рост, митотическую активность и иммунный фенотип. Наиболее надёжный подход — сочетание гистохимических и иммуногистохимических методов с оценкой обычной морфологии.