2) молекулярно-генетический метод (+)
3) люминесцентная микроскопия мокроты
4) посев мокроты на твердую питательную среду
Молекулярно-генетические методы являются наиболее быстрым способом выявления лекарственно-устойчивых штаммов Mycobacterium tuberculosis, поскольку непосредственно обнаруживают ДНК возбудителя и мутации, связанные с устойчивостью к препаратам. ПЦР-тесты, включая Xpert MTB/RIF или Xpert MTB/RIF Ultra, позволяют одновременно подтвердить наличие микобактерий и выявить изменения в гене rpoB, служащие маркером устойчивости к рифампицину. Результат может быть получен в течение нескольких часов, что особенно важно при подозрении на лекарственно-устойчивый туберкулёз у ребёнка.
Более расширенные молекулярные тесты, например линейные зондовые анализы, выявляют мутации устойчивости к рифампицину, изониазиду и некоторым препаратам второго ряда. Люминесцентная микроскопия позволяет быстро обнаружить кислотоустойчивые микобактерии, но не определяет их лекарственную чувствительность. Культуральные методы требуют размножения микобактерий: система BACTEC MGIT 960 сокращает сроки по сравнению с посевом на плотные среды, однако всё равно уступает молекулярной диагностике по скорости.
| Метод | Основной диагностический результат | Ориентировочный срок | Значение для выявления устойчивости |
|---|---|---|---|
| Молекулярно-генетический тест | ДНК M. tuberculosis и мутации генов устойчивости | От нескольких часов до 1–2 суток | Наиболее быстрое выявление устойчивости; объём определяемых препаратов зависит от тест-системы |
| Линейный зондовый анализ | Видоспецифическая ДНК и мутации в генах rpoB, katG, inhA и других | 1–2 суток | Позволяет быстро оценить устойчивость к рифампицину и изониазиду, а в отдельных наборах — к препаратам второго ряда |
| BACTEC MGIT 960 | Рост микобактерий в жидкой питательной среде | Обычно несколько дней и более | Определяет фенотипическую лекарственную чувствительность, но медленнее молекулярных методов |
| Посев на плотную питательную среду | Рост и идентификация культуры микобактерий | Несколько недель | Надёжный культуральный метод, однако наиболее продолжительный |
| Люминесцентная микроскопия | Кислотоустойчивые микобактерии в исследуемом материале | Часы | Не определяет видовую принадлежность с достаточной точностью и лекарственную устойчивость |
| Фенотипическое тестирование лекарственной чувствительности | Рост или отсутствие роста культуры при воздействии препаратов | Дни–недели | Подтверждает фактическую чувствительность, но требует выделенной жизнеспособной культуры |
Молекулярное выявление мутаций отражает генотипический маркер устойчивости и не всегда охватывает весь спектр возможных механизмов резистентности. Поэтому при положительном результате необходимо направить материал на культуральное исследование и расширенное тестирование лекарственной чувствительности. Отрицательный молекулярный результат не исключает туберкулёз при низкой бактериальной нагрузке или некачественном образце и оценивается вместе с клиническими, лучевыми и эпидемиологическими данными.