2) весовым
3) титриметрическим (+)
4) визуально-колориметрическим
Метод Кьельдаля относится к титриметрическим методам, поскольку количественный результат получают по объёму раствора титранта, израсходованного на определение аммиака. В ходе минерализации исследуемой пробы концентрированной серной кислотой в присутствии катализатора органический азот переводится в сульфат аммония. После подщелачивания образовавшийся аммиак отгоняют с водяным паром и поглощают известным объёмом кислоты либо раствором борной кислоты.
Количество аммиака устанавливают титрованием, обычно прямым или обратным, с использованием стандартного раствора кислоты или щёлочи. По результату рассчитывают содержание общего азота, а затем пересчитывают его на белок с применением соответствующего коэффициента, наиболее часто 6,25, но для отдельных продуктов и биологических материалов коэффициент может отличаться. Таким образом, измеряемым аналитическим сигналом является не окраска и не масса осадка, а объём титранта, эквивалентный количеству выделившегося аммиака.
| Метод или этап | Измеряемый аналитический сигнал | Принцип | Результат и особенности |
|---|---|---|---|
| Визуальный | Изменение окраски, наличие или отсутствие признака | Оценка реакции без количественного измерения физической величины | Преимущественно качественное или ориентировочное определение |
| Весовой | Масса выделенного продукта или осадка | Выделение, высушивание и взвешивание определяемого соединения | Гравиметрический результат; для метода Кьельдаля не является основным измерительным этапом |
| Титриметрический | Объём стандартного раствора титранта | Стехиометрическая реакция определяемого вещества с раствором известной концентрации | Именно этот принцип используется при количественном учёте аммиака в методе Кьельдаля |
| Визуально-колориметрический | Интенсивность окраски раствора | Сравнение окраски с эталоном или измерение оптической плотности | Применим для ряда фотометрических реакций, но не характеризует классический метод Кьельдаля |
| Минерализация по Кьельдалю | Количество азота, переведённого в аммонийную форму | Разрушение органической матрицы серной кислотой с образованием аммонийной соли | Подготовительный этап перед выделением аммиака и титриметрическим измерением |
| Пересчёт азота на белок | Расчётная величина | Умножение содержания азота на белковый коэффициент | Метод определяет общий азот, поэтому небелковые азотсодержащие соединения могут влиять на итоговую оценку |
Классический метод Кьельдаля не является специфичным для белка: он определяет преимущественно общий органический азот, который затем условно пересчитывается в белок. Нитраты и нитриты обычно не учитываются без специальной модификации процедуры. Точность анализа зависит от полноты минерализации, эффективности отгонки аммиака, правильности стандартизации титранта и выбора коэффициента пересчёта.