2) биохимическим
3) фотометрическим (+)
4) микроскопическим
Фотометрический метод основан на регистрации изменения оптической плотности реакционной смеси после химического превращения этанола. Этанол окисляется, например, раствором дихромата в кислой среде, вследствие чего изменяется интенсивность окраски; величина поглощения света связана с количеством прореагировавшего вещества и при соблюдении условий реакции пропорциональна концентрации этанола. Наличие этанола устанавливают по появлению характерного оптического сигнала, а количественное содержание рассчитывают по калибровочной зависимости с учетом холостой пробы и стандартов.
В современных лабораторных вариантах фотометрическое определение может быть основано и на ферментативной реакции с алкогольдегидрогеназой. При этом этанол превращается в ацетальдегид, а кофермент NAD+ восстанавливается до NADH, поглощающего ультрафиолетовое излучение при 340 нм. Изменение оптической плотности позволяет определить концентрацию этанола в крови, моче и других жидких биологических средах. Поэтому правильным является фотометрический метод: его диагностический принцип заключается не в визуальном обнаружении клеточных структур или общем спектральном анализе, а в количественной оценке светопоглощения продукта специфической реакции.
Для судебно-медицинской оценки важны правильный отбор и герметичное хранение образца, поскольку испарение этанола, микробная ферментация и длительное хранение способны исказить результат. Биохимические реакции могут использоваться как основа фотометрического анализа, однако термин биохимический метод характеризует механизм реакции, а фотометрический — способ регистрации ее результата. Микроскопия для определения растворенного этанола непригодна.
| Подход | Принцип | Результат | Основное ограничение |
|---|---|---|---|
| Фотометрический | Измерение оптической плотности окрашенной или поглощающей реакционной смеси | Наличие и расчет концентрации этанола по калибровке | Возможны помехи от окрашенных компонентов и других окисляемых веществ |
| Ферментативный биохимический | Окисление этанола алкогольдегидрогеназой с образованием NADH | Концентрация по изменению поглощения, обычно при 340 нм | Зависимость от активности фермента, pH, температуры и специфичности реакции |
| Химический окислительный | Окисление этанола дихроматом или другим реагентом с изменением окраски | Оценка содержания по интенсивности окраски | Меньшая специфичность при наличии сопутствующих восстановителей |
| Газовая хроматография | Разделение летучих компонентов и регистрация этанола детектором | Высокоспецифичное качественное и количественное определение | Требует сложного оборудования и квалифицированной интерпретации |
| Спектральный анализ | Изучение спектра поглощения или излучения вещества | Спектральная характеристика образца | Без специфической реакции возможна недостаточная селективность |
| Микроскопический | Визуализация клеток, кристаллов и других микроструктур | Морфологическая характеристика материала | Растворенный этанол микроскопически не определяется |
Фотометрический результат должен оцениваться с учетом калибровки прибора, контрольных образцов и возможных интерферирующих веществ. Для судебной экспертизы особенно значимы предотвращение испарения этанола и исключение посмертного образования спирта микроорганизмами. При спорных или юридически значимых измерениях количественный вывод целесообразно подтверждать методом газовой хроматографии. Диагностическое значение имеет не только числовая концентрация, но и достоверность преаналитического этапа исследования.